脊尾白虾感染白斑综合症病毒在江苏的流行病学调查及防控对策

论文摘要

白斑综合征病毒(White spot syndrome virus, WSSV)是上世纪九十年代以来感染中国对虾、斑节对虾、凡纳滨对虾等发生白斑综合征的一种DNA病毒,该病毒引起了虾类疾病全世界大流行,极大地危害全球虾类养殖业。近年来在江苏沿海地区暴发虾病,养殖的脊尾白虾大规模死亡,严重影响地区海水养殖产业的经济发展。对该地区养殖的脊尾白虾大规模暴发疫病进行了流行病学、细胞超微病理学的研究。从发病的脊尾白虾不同组织中可观察到WSSV病毒粒子的存在,尽管脊尾白虾病虾甲壳未显示明显的白斑症状,但人工感染试验表明,江苏沿海地区脊尾白虾的大规模死亡与WSSV感染有关。2010年8月份至2011年5月份期间,对江苏省沿海脊尾白虾养殖密集地区的21个站点进行了WSSV感染疾病的流行调查,采用PCR方法对所采集样品进行了WSSV检测。调查发现,21个站点中,80%的脊尾白虾可检测出WSSV,且发病虾塘出现大规模死虾现象,其中盐城市脊尾白虾发病情况比较严重,发病情况由重点区域向邻近区域扩散；2010年9月份和10月份脊尾白虾的发病率和死亡率高于其他月份。在虾蟹混养模式中,采集到的蟹类样品WSSV阳性检出率很高；江苏外海海域捕捞的虾类和蟹类样品可检测到WSSV。采用透射电镜观察了感染WSSV的脊尾白虾细胞超微结构。研究发现,感染WSSV的脊尾白虾的肠、肝胰腺、鳃、肌肉组织细胞有明显病变,主要表现为：细胞核膨大肿胀,染色质边聚,粗面内质网扩张,线粒体内嵴溶解,溶酶体增多；感染严重的细胞核破裂,病毒粒子释放到细胞质中。观察到的病毒粒子与已有报道的WSSV形态十分相似,但未见其尾状结构,只见乳头状突起。针对WSSV部分可变区设计了特异性引物3对,PCR扩增WSSV江苏脊尾白虾分离株DF1,与GenBank上已有的WSSV序列比对。结果发现,WSSV江苏脊尾白虾分离株DF1可变区与已报道的WSSV泰国株和中国株的序列有明显差异,与台湾株的进化关系较近。推测DF1株可能由与其他分离株共同的祖先通过序列的缺失、插入独立进化而来。通过对脊尾白虾的生长特性以及江苏沿海养殖环境的调查,综合考虑多方面因素,提出了系列防控措施,以期预防wssv在江苏脊尾白虾大规模暴发流行。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一篇 文献综述
• 第一章 脊尾白虾的研究概况
• 1 形态特征
• 2 生活习性
• 3 食性
• 4 繁殖习性
• 5 养殖技术
• 5.1 池塘的清整及注水
• 5.2 抱卵虾或虾苗的放养
• 5.3 养成管理
• 5.3.1 投饵管理
• 5.3.2 饲养管理
• 5.4 成虾捕捞
• 6 养殖模式
• 7 养殖病害
• 7.1 病毒性疾病
• 7.2 细菌性疾病
• 7.3 原生动物引起的疾病
• 参考文献
• 第二章 白斑综合征病毒（WSSV）的研究概况
• 1 病原学
• 1.1 WSSV的命名和分类地位
• 1.2 WSSV的形态结构
• 1.3 WSSV的基因组
• 2 流行病学
• 2.1 宿主范围
• 2.2 传播途径
• 2.2.1 水平传播
• 2.2.2 垂直传播
• 2.2.3 其他传播方式
• 3 WSSV感染虾类的病理学
• 3.1 临床症状
• 3.2 病理特征
• 3.3 WSSV感染虾类的致病机理
• 3.4 感染过程
• 4 WSSV的检测方法
• 4.1 形态学检测方法
• 4.2 免疫学检测方法
• 4.3 分子生物学检测方法
• 4.3.1 核酸探针技术
• 4.3.2 PCR检测方法
• 4.3.3 DNA微阵列
• 5 WSSV感染对虾的防治措施
• 5.1 消除WSSV传染源,切断WSSV传播途径
• 5.1.1 消除WSSV水平传播的传染源和传播途径
• 5.1.2 消除WSSV垂直传播的传染源和传播途径
• 5.2 增强对虾体质,提高对虾抗病能力
• 5.3 选育抗性品种
• 5.4 调整养殖模式
• 5.5 药物防治
• 6 本研究目的和意义
• 参考文献
• 第二篇 研究内容
• 第一章 脊尾白虾感染白斑综合征病毒在江苏的流行病学调查
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 WSSV的检测
• 1.2.2 人工感染试验
• 2 结果
• 2.1 发病症状
• 2.1.1 群体发病症状
• 2.1.2 个体发病症状
• 2.2 发病区域
• 2.3 发病情况
• 2.3.1 不同月份的脊尾白虾携带WSSV情况调查
• 2.3.2 饵料及环境样品携带WSSV情况调查
• 2.3.3 海捕野生甲壳类样品携带WSSV情况调查
• 2.4 人工感染结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二章 脊尾白虾感染白斑综合征病毒的细胞病理学研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 病虾的剖检
• 2.2 超微结构的观察
• 2.2.1 疑病毒粒子的观察
• 2.2.2 病虾细胞的超微病理观察
• 3 讨论
• 3.1 病毒的结构特征
• 3.2 病虾的病理特征
• 参考文献
• 第三章 脊尾白虾白斑综合征病毒的部分基因分析
• 1 材料与方法
• 1.1 生物样品
• 1.2 方法
• 1.2.1 WSSV DNA的提取
• 1.2.2 PCR引物的设计与合成
• 1.2.3 PCR反应体系及程序
• 1.2.4 琼脂糖凝胶电泳
• 1.2.5 PCR产物纯化及测序
• 1.2.6 序列比对及构建进化树
• 2 结果
• 2.1 PCR结果
• 2.2 各可变区序列差异
• 2.2.1 ORF14/15
• 2.2.2 ORF75
• 2.2.3 ORF94
• 2.2.4 胸腺嘧啶合成酶基因（TS）
• 3 讨论
• 3.1 ORF14/15
• 3.2 ORF75、ORF94
• 参考文献
• 第四章 脊尾白虾白斑综合征的防控对策
• 1 影响发病的因素
• 1.1 种质因素
• 1.2 环境因素
• 1.3 饵料因素
• 2 防控措施
• 2.1 选育优质苗种提高自身体质
• 2.2 改善养殖环境切断传播途径
• 2.3 改进养殖模式调整养殖结构
• 2.4 加强饲喂管理增强免疫预防
• 参考文献
• 全文总结
• 附录
• 致谢