论文摘要
背景和目的急性白血病是一类造血干、祖细胞来源的恶性克隆性血液系统疾病。急性白血病细胞对化疗药物耐药并复发是导致患者治疗失败的主要原因之一,探讨其耐药机制一直是临床医疗活动中最为重要的课题。白血病细胞DNA的修复异常及其相关基因的表达异常与化疗耐药有密切关系,因此,寻找并鉴定这类分子标志物可以指导临床制定合理的化疗方案,提高疗效,实现个体化治疗。其中,核糖核苷酸还原酶M1 （ribonucleotide reductase subunit, RRM1）是目前研究较多的一个基因,作为核糖核苷酸还原酶其中的一个亚单位,在非小细胞肺癌和胰腺癌等实体瘤中,发现它的表达高低与吉西他滨耐药有关,影响疗效,因此RRM1在判断患者预后方面也有重要的作用。国内外对于RRM1的研究多集中在实体瘤,在急性白血病中的研究甚少,仅通过基因阵列技术在难治性急性髓系白血病M2a的基因表达谱中发现RRM1表达明显上调,其意义有待进一步探讨。本文通过RT-PCR方法检测急性白血病患者骨髓单个核细胞中RRM1 mRNA的表达水平,并通过细胞培养技术研究了RRM1 mRNA表达水平与阿糖胞苷及吉西他滨体外对细胞凋亡的相关性；通过对患者的随访,分析RRM1 mRNA表达与疗效及预后的关系。材料与方法1.研究对象急性白血病患者38例均为郑州大学第一附属医院血液内科2009年3月至2009年6月住院的初治病例。所有患者经过血常规、骨髓细胞形态学、细胞化学、免疫表型及细胞遗传学检查,符合急性白血病的诊断标准。男性20例,女性18例,中位年龄36岁（16-63岁）。其中AML 22例（M29例,M38例,M55例）,ALL16例（B-ALL9例,T-ALL 7例）。对照组为同期血液科非恶性血液病患者10例,其中男4例,女6例,中位年龄38岁（21岁-57岁）。2.RT-PCR分离单个核细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,逆转录成cDNA,后PCR扩增25个循环。电泳后,紫外灯下照相,所有阳性结果进行灰度分析并计算RRM1/β-actin的比值。3.细胞凋亡测定收集单个核细胞后,加入吉西他滨、阿糖胞苷药物后在37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱内培养24小时,用流式细胞仪测定细胞凋亡。4.随访对38例急性白血病患者随访,观察化疗疗效及生存情况。5.统计学处理应用SPSS16.0统计软件进行统计学处理。计量资料用平均值±标准差（x±SD）或中位数（M）表示,计数资料采用χ2检验,两样本均数的比较采用独立样本的t检验,多样本均数的比较采用方差分析。采用Kaplan-Meier进行生存分析,用Log-rank检验差异性。以α=0.05作为检验水准。结果1.RRM1 mRNA在初治急性白血病中的表达38例初治急性白血病患者中,22例患者骨髓单个核细胞表达RRM1 mRNA,阳性率为57.9%,对照组阳性率为20.0%（2/10）,两者之间的差异有显著统计学意义（P<0.05）。2.RRM1 mRNA在不同类型急性白血病中的表达在22例AML患者中13例患者骨髓单个核细胞表达RRM1 mRNA,阳性率为50.9%,而在16例ALL中,阳性率为56.3%,两者之间的差异无统计学意义（P>0.05）。3.急性白血病细胞RRM1 mRNA表达水平与药物诱导凋亡的关系以RRM1 mRNA表达量（相对于β-actin）的中位数为界,分为低表达组和高表达组。患者骨髓单个核细胞分别经阿糖胞苷组和吉西他滨处理24小时后,均可检测到细胞凋亡,且显著高于对照组（P<0.05）；而RRM1 mRNA高表达组的药物诱导的单个核细胞的凋亡率（阿糖胞苷8.07±0.97%,吉西他滨8.32±1.14%）均显著低于RRM1 mRNA低表达组者（阿糖胞苷31.97±3.14%,吉西他滨33.58±4.19%）,差异有统计学意义（P<0.01）4.RRM1 mRNA表达与临床特征的关系RRM1 mRNA的表达在性别、年龄、骨髓原始细胞数及髓外浸润方面的差异无统计学意义（P>0.05）,与这些临床特征没有相关性。5.RRM1 mRNA与白血病患者治疗效果的相关分析在AML-M3之外的其它类型白血病中,RRM1 mRNA高表达的患者的中位生存期短于低表达组,它们之间差异有统计学意义（P<0.05）；而AML-M3患者的中位生存期与RRM1 mRNA表达高低无关（P>0.05）。结论1.RRM1 mRNA在急性白血病中的表达显著高于对照组。2. RRM1 mRNA在不同类型急性白血病中表达水平无显著差异。3.RRM1 mRNA的表达水平高者,阿糖胞苷和吉西他滨对患者骨髓单个核细胞的凋亡诱导作用弱。4. RRM1 mRNA高表达的患者中位生存期短于RRM1 mRNA低表达的患者。