131I标记HER2高亲和力模拟肽对乳腺癌细胞的靶向杀伤作用

论文摘要

目的:用放射性同位素131I标记HER2高亲和力模拟肽B2-S22-AFA,选用乳腺癌HER2高表达细胞株SKBR3及HER2低表达细胞株MDA-MB-231作为对照,观察131I标记B2-S22-AFA与乳腺癌细胞HER2受体的结合能力及其对乳腺癌细胞的靶向杀伤能力,为高表达HER2的乳腺癌及其它肿瘤的放射性靶向治疗研究提供依据。方法:1.收集体外培养的对数生长期的人乳腺癌细胞SKBR3和MDA-MB-231,用细胞裂解液裂解细胞,考马斯亮蓝染色法测定细胞总蛋白含量,蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测SKBR3、MDA-MB-231细胞表面HER2受体蛋白表达水平。2. MTT法观察B2-S22-AFA在不同浓度EGF作用下对SKBR3、MDA-MB-231细胞生长的抑制作用,选择合适的EGF浓度作为后继实验条件。3.溴代琥珀酰亚胺（NBS）法进行131I标记B2-S22-AFA,三氯醋酸法测定反应物标记率,Sephadex G-25凝胶层析柱过滤纯化、以恒定速度连续收集洗脱液,测定每管放射性。以每管的放射性活度对管次作图,得到131I标记模拟肽的洗脱图,收集蛋白峰各管标记物进行产品质量鉴定,包括放化纯度、放射性比活度及免疫活性,并进行稳定性实验。4.细胞结合实验:取等量131I标记的B2-S22-AFA,加入至过量的乳腺癌细胞SKBR3、MDA-MB-231中,分别测定标记物与2种细胞的结合率。5.在EGF促进细胞增殖的条件下,活细胞计数法观察131I标记B2-S22-AFA对SKBR3、MDA-MB-231细胞的杀伤作用。结果:1. Western Blot检测结果显示:HER2受体蛋白在SKBR3呈强阳性表达,条带明显;在MDA-MB-231无条带出现,为低表达。2.不同浓度EGF对乳腺癌细胞SKBR3、MDA-MB-231生长的促进作用不同,浓度越高,促生长作用越明显;相同浓度的EGF对SKBR3的促进作用明显强于MDA-MB-231;48h以上的促生长作用较明显。3. B2-S22-AFA对HER2高表达的SKBR3细胞的生长有明显抑制作用,抑制率可达（30.3±3.5）%,对HER2低表达的MDA-MB-231细胞的生长无明显抑制作用。4. NBS法对B2-S22-AFA进行131I标记,标记率为64.8%～69.6%,经凝胶过滤纯化后得到明显的双峰曲线,其蛋白峰高尖窄,盐峰低平,未见损伤峰和聚合峰出现。标记后模拟肽的放射化学纯度高于95%,稳定性较好,37℃放置24 h、48 h、72 h放化纯度分别为86.3%、77.4%、65.8%。5. 131I标记B2-S22-AFA与SKBR3的结合率明显高于与MDA-MB-231的结合率,前者接近后者的十倍。6. 131I标记B2-S22-AFA在加入后48 h对细胞的抑制作用最强,对HER2高表达的SKBR3细胞的抑制率为（51.2±3.0 ）%,明显高于HER2低表达的乳腺癌细胞MDA-MB-231及其它实验组（P <0.05）。结论: 1. Western Blot检测结果说明SKBR3细胞HER2表达率高,MDA-MB-231细胞HER2表达率低。2. EGF对HER2高表达和低表达的乳腺癌细胞的生长均有促进作用,对HER2高表达的细胞作用明显。3. B2-S22-AFA可与表达HER2的乳腺癌细胞特异结合,且结合率随细胞HER2蛋白表达水平的增加而升高。B2-S22-AFA对HER2高表达的乳腺癌细胞有明显抑制作用,对HER2低表达的乳腺癌细胞无明显抑制作用。4. NBS法进行131I标记小分子模拟肽方便快捷,稳定性较好,对多肽的免疫活性无明显损害。5. 131I标记B2-S22-AFA可与HER2高表达的乳腺癌细胞特异结合并能明显抑制其在体外的生长,为制备高表达HER2的乳腺癌及其它肿瘤的放射性靶向治疗药物提供依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 1.1 乳腺癌与HER2 的关系
• 1.2 HER2 受体的结构和功能
• 1.3 HER2 高亲和力模拟肽82-522-AFA 的提出
• 1.4 课题的提出及研究思路
• 第2章 人乳腺癌细胞表面HER2 受体表达水平的Western Blot 分析
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 第3章 HER2 模拟肽82-522-AFA 对乳腺癌细胞增殖的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 第4章 NBS法 I 标记HER2模拟肽82-522-AFA的实验研究
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 151I 标记HER2 模拟肽82-522-AFA 对乳腺癌细胞杀伤作用的研究'>第5章¹⁵¹I 标记HER2 模拟肽82-522-AFA 对乳腺癌细胞杀伤作用的研究
• 5.1 材料与方法
• 5.2 结果
• 5.3 讨论
• 第6章 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 本研究在以下几方面尚需改进
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果