猪Fas、Caspase-3、白细胞介素4、白细胞介素10基因的克隆和序列分析

论文摘要

本实验从PK-15细胞和ConA刺激的巴马小型猪的外周血淋巴细胞分别提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出猪细胞凋亡基因Fas、Caspase-3和细胞因子白细胞介素4（IL-4）和白细胞介素10（IL-10）,将其分别克隆到PMD18-T载体上,进行序列分析。 结果显示,克隆的Fas与GenBank上登录的猪Fas基因序列同源性为100%,在核苷酸序列与推导的氨基酸水平上,与人、牛、羊的同源性分别为73.4%、79.2%、76.4%和56.2%、67.0%、64.6%。Caspase-3的基因序列与GenBank上登录的猪Caspase-3基因核苷酸序列与推导的氨基酸序列同源性为98.9%和98.6%。与人、鼠Caspase-3基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列同源性为88.6%、83.5%和87.8%、86.7%。 克隆的IL-4与GenBank上登录的猪IL-4基因核苷酸序列与推导的氨基酸序列同源性为98.8-100%和97.0-99.3%。在核苷酸序列与推导的氨基酸水平上,与人、牛、羊的同源性分别为79.9%、85.3%、85.3%和69.4%、79.9%、79.1%。IL-10与GenBank上登录的猪IL-10基因核苷酸序列与推导的氨基酸序列同源性为99.2%和97.7%。在核苷酸序列与推导的氨基酸水平上,与人、牛、羊的同源性分别为84.1%、85.2%、84.8%和73.9%、79.5%、75.6%

论文目录

• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要实验材料
• 1.1.2 引物
• 1.1.3 试剂及配制
• 1.1.4 仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 细胞的制备
• 1.2.2 RNA的抽提
• 1.2.3 反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）
• 1.2.4 PCR产物胶回收
• 1.2.5.DHS。菌种的复苏
• 1.2.6 感受态细胞的制备
• 1.2.7 基因克隆
• 1.2.8 重组质粒酶切鉴定
• 1.2.9 基因测序
• 1.2.10 测序结果的处理与分析
• 2 结果
• 2.1 Fas和Csapase-3的基因扩增
• 2.2 Fas和Csapase-3的重组质粒的鉴定
• 2.3 IL-4和IL-10的基因扩增
• 2.4 IL-4和IL-10重组质粒的鉴定
• 2.5 测序结果及分析
• 2.5.1 Fas和Caspase-3测序结果及分析
• 2.5.2 IL-4和IL-10测序结果及分析
• 2.6 猪与其它种间动物Fas基因核苷酸和氨基酸比较分析
• 2.7 猪与其它种间动物Caspase-3基因核苷酸和氨基酸比较分析
• 2.8 巴马猪与其它品种猪IL-4基因核苷酸和氨基酸比较分析
• 2.9 巴马猪与其它种间动物IL-4基因核苷酸和氨基酸比较分析
• 2.10 巴马猪与其它种间动物IL-10基因核苷酸和氨基酸比较分析
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文情况