NF-κB p65反义寡核苷酸对TNBS诱导BALB/C小鼠结肠炎症的影响

论文摘要

目的:探讨不同剂量的TNBS直肠灌注诱导BALB/C小鼠炎症性肠病模型的特点,从疾病活动指数、生存率、肠道黏膜病理改变等方面综合评估,选择最佳造模剂量,建立最适于本实验要求的动物模型。方法:将禁食24小时、不禁饮的BALB/C小鼠随机分为5组,每组16只。第一组直肠灌注1.0mgTNBS+50%乙醇溶液,第二组直肠灌注1.5mgTNBS+50%乙醇溶液,第三组直肠灌注2.0mgTNBS+50%乙醇溶液,第四组直肠灌注2.5mgTNBS+50%乙醇溶液,对照组直肠灌注生理盐水,观察各小鼠每日表现、称重、化验大便常规、潜血。灌肠后第二天起每天统计生存率,第7天统计总生存率,并处死小鼠,收集标本,光镜下观察肠黏膜病理特征并评分,检测各组小鼠肠黏膜内NF-κB p65的表达,分析结果。结果:各组小鼠（按TNBS lmg、1.5mg、2.0mg、2.5mg组、空白对照顺序排列）DAI评分:5.12±0.68、6.36±0.71、11.54±1.28、12.75±1.62、0;病理病理评分:4.26±0.78、5.26±0.98、10.32±1.15、10.72±1.35、1.95±0.50;生存率:100%、93.7%、62.5%、37.5%、100%,NF-κB p65阳性细胞表达评分:23.06±2.88、25.26±2.37、50.26±4.26、55.26±4.68、1.26±0.86。从结果可以发现:随着TNBS剂量的增加,DAI评分、肠道病理评分逐渐升高,TNBS lmg、1.5mg组与TNBS 2.0mg、2.5mg组相比差异有统计学意义（P<0.05）,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）;TNBS l.0mg、1.5mg组和TNBS 2.0mg、2.5mg组两组组内比较差异无统计学意义（P>0.05）。随着剂量的增加,小鼠的生存率急剧下降,其中2.0mg组与l.0mg、1.5mg、2.5mg组相比差异有统计学意义（P<0.05）;而NF-κB p65在2.0mg、2.5mg组间相比差异无统计学意义（P>0.05）,与lmg、1.5mg组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论:综合比较各组小鼠的疾病活动指数、生存率、病理变化等指标,TNBS 2.0mg能够诱导出理想的适宜研究的动物模型。因此确定TNBS 2.0mg是最佳的造模剂量。目的:探讨NF-κB p65反义寡核苷酸对TNBS诱导BALB/C小鼠炎症性肠病模型肠道炎症,TNF-α、IL-1βmRNA及NF-κB p65、TNF-α、IL-10、IL-1β蛋白表达表达的影响,研究其对实验性小鼠结肠炎的治疗效果及机制。方法:建立2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）炎症性肠病小鼠模型,将造模成功的36只BALB/C小鼠随机分为模型对照组（UC组）、NF-κB p65反义寡核苷酸组（ASODN组）,错义寡核苷酸组（MSODN组）,另设正常对照组（NC组）。ASODN组、MSODN组小鼠分别于造模后24小时,采用反义寡核苷酸、错义寡核苷酸灌肠治疗,观察各小鼠每日表现、称重、化验大便常规、潜血;于灌肠后第7天处死小鼠,光镜下观察肠道炎症并评分,逆转录聚合酶链反应（RT-PCT）检测结肠组织TNF-α、IL-1βmRNA表达,免疫组化法检测肠黏膜中TNF-α、IL-1β、IL-10、NF-κB p65阳性细胞表达,Western blot检测小鼠结肠组织核蛋白中NF-κB p65的表达水平。分析检测结果。结果:各组小鼠（按NC组、ASODN组、MSODN组、UC组顺序排列）DAI评分为:1.02±0.26、4.36±0.54、11.76±1.21、12.02±1.18;病理评分为:1.95±0.50、5.26±0.88、10.40±1.28、10.32±1.25;RT-PCR检测TNF-αmRNA表达为:0.36±0.04、0.64±0.05、1.29±0.05、1.25±0.07,IL-1βmRNA表达为:0.21±0.04、0.46±0.03、1.00±0.07、1.00±0.03;免疫组化检测TNF-α阳性细胞为:64.17±11.29、82.68±14.30、166.49±11.63、168.48±11.89,IL-1β阳性细胞为:11.68±3.52、42.42±5.77、120.43±28.2、115.74±27.63,IL-10阳性细胞为:168.32±10.66、146.68±6.02、58.44±10.92、62.50±11.57,NF-κB p65阳性细胞为: 2.42±1.37、22.66±5.32、61.09±3.73、58.38±4.49;Western blot检测核内NF-κB p6蛋白水平为:0.372±0.02、1.05±0.09、2.34±0.09、2.36±0.08。从结果发现ASODN组DAI、肠道病理评分、TNF-α、IL-1βmRNA、TNF-α、IL-1β阳性细胞、NF-κB p65阳性细胞及核蛋白内NF-κB p65蛋白水平较UC组、MSODN组明显降低（P<0.05）,高于NC组（P<0.05）,差异有统计学意义,;而IL-10阳性细胞较UC组、MSODN组高（P<0.05）,低于NC组（P<0.05）,差异有统计学意义;而UC组、MSODN组组内各项指标比较,差异无统计学意义（P>0.05）结论:1、NF-κBp65 ASODN干预TNBS诱导的炎症性肠病模型小鼠,小鼠结肠黏膜中NF-κB p65的表达减少,提示NF-κBp65 ASODN干预可抑制NF-κB的活化。2、NF-κBp65 ASODN干预后,小鼠结肠黏膜中促炎细胞因子TNF-α、IL-1β的表达下调,抑炎细胞因子IL-10的表达上调,病理组织学明显改善,临床症状明显减轻,提示NF-κB p65 ASODN对实验性小鼠结肠炎症有治疗作用,有望成为治疗炎症性肠病新药物。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写词表
• 引言
• 第一部分：TNBS 动物模型的建立
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分：NF-κB p65 反义寡核苷酸对 TNBS 动物模型小鼠结肠炎症的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 结束语
• 致谢
• 文献综述
• 攻读博士学位期间研究成果
• 在读期间所获资助课题
• 在读期间获得的奖励