论文摘要
SRY／Sry基因是公认的哺乳动物性别决定基因。研究表明，SPY／Sry基因正常存在，性腺就发育成雄性；相反，如果缺失或突变，性腺就发育成雌性。小鼠的性别决定发生在妊娠的10.5 d～12.5 d，Sry基因也仅在此时表达。本实验室已经通过肌肉注射Sry核酸疫苗的方法成功遏制了胚胎期Sry基因的作用途径，初步实现了胚胎雄性向雌性反转的性别控制，获得了XY雌性个体。下一步要研究的问题有很多，比如优化此疫苗的免疫条件，研究其作用原理等。本实验主要针对Sry核酸疫苗的免疫方式进行了初步的探索，通过对不同免疫方式的免疫效率进行比较，分析此疫苗免疫方式与免疫效率的相关性，以便对此疫苗进行更深入的研究。实验过程中采用了基因枪注射与肌肉注射两种方法进行免疫，免疫剂量分别为2ug／只小鼠和100ug／只小鼠，每隔一周加强免疫一次，共免疫三次。与初次实验相比，本实验对疫苗的制备过程及免疫效率的检测过程做了较大改进，具体是疫苗制备过程中去除了疫苗本身所含的内毒素，仔鼠检测过程中采用巢式PCR及southern blotting技术对样品进行双重验证等。结果：1．肌肉注射组共检测了181只仔鼠，有2只发生了雄性向雌性的性别反转，反转效率约1.1％；基因枪注射组共检测240只仔鼠，有2只发生了性别反转，反转效率约0.8％。结论：这两种方法的免疫效率较低提示除了免疫方式以外还有更重要的因素影响此核酸疫苗的免疫效率；同时，性反转个体的再次获得又一次证明了此疫苗可有效阻断胚胎期的雄性发育通路，实现胚胎向雌性的性别反转。
论文目录
摘要Abstract第一部分 绪论一 哺乳动物性别决定研究的历史回顾1 睾丸决定因子-TDF假说2 SRY/Sry基因及其表达蛋白的研究概况3 性别决定的分子机制二 哺乳动物性别控制方法的应用现状三 核酸疫苗的发展历史1 核酸免疫的研究历程2 核酸免疫的免疫应答机理3 核酸疫苗研制的技术路线4 核酸免疫的接种途径和剂量5 增强核酸疫苗效力的途径6 核酸疫苗的优势7 核酸疫苗的安全性第二部分 本题的研究内容和意义一 本题的立题依据二 本题的实验思路1 制备核酸疫苗并免疫实验动物2 检测仔鼠3 统计学分析三 本题的研究目的及意义第三部分 实验材料和方法一 实验材料1 实验动物2 菌株及质粒3 酶、试剂盒及各种化学试剂二 实验过程1 鉴定pCR3.1-Sry重组质粒的活性状态2 制备核酸疫苗3 免疫动物并进行动物交配4 检测仔鼠三 统计分析第四部分 结果和分析一 重组质粒的状态及准确性二 核酸疫苗的制备及质量控制三 母鼠及其子代小鼠的统计结果1 肌肉注射组统计结果2 基因枪注射组统计结果四 仔鼠的检测结果1 PCR法检测仔鼠的基因型2 Southern blotting进一步验证PCR阳性仔鼠的基因型3 性反转仔鼠表型与正常雌鼠无显著差别五 核酸疫苗免疫效率的计算第五部分 讨论和结论一 核酸疫苗质量的控制1 质粒的状态及准确性验证2 核酸疫苗浓度和纯度的控制3 质粒在真核细胞中表达的有效性二 免疫方法和免疫剂量的实施三 两种免疫方式的母鼠产仔率、产仔量及仔鼠性比的比较分析四 仔鼠基因型的检测过程分析1 模板DNA纯度和浓度的要求2 PCR反应体系五 免疫效率低的原因分析六 结论参考文献附录附录一 溶液配制附录二 重组质粒中Sry基因片段的测序结果附录三 免疫孕鼠产仔的原始数据攻读硕士学位期间取得的科研成果致谢
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标签：哺乳动物性别控制论文; 核酸疫苗论文; 免疫方式论文;
