论文摘要
随着人类基因组测序工作的完成,生命科学进入了功能基因组和蛋白质组学时代,越来越多的表征机体生理、病理状况的蛋白质生物标志物被发现,为疾病诊断、预后、治疗监测、和药物筛选提供了强有力的研究手段。尽管蛋白质的表达水平较信使RNA(mRNA)更能准确地反映出生物体表型的异常,常规样品如组织或体液中蛋白标志物的丰度一般都非常低,加上尚未找到类似于核酸聚合链反应(PCR)的蛋白质扩增方法,发展蛋白质的超高灵敏检测技术成为生物标志物得以实际应用的基础。单分子检测是生物检测技术的最高极限,我们拟结合单分子流式检测技术和微珠免疫分析方法创建超高灵敏蛋白质免疫化学分析平台,为实现疾病的早期诊断创造必要条件。本论文的工作是以目前应用于单个DNA分子片断长度测定的流式细胞仪为模板研制单分子检测水平的流式检测仪,为超高灵敏蛋白质免疫化学分析平台的建立提供硬件支持。本论文共由三章组成:第一章为文献综述,主要介绍单分子检测的常用技术、单分子荧光检测的原理、单分子荧光检测技术的关键问题以及单分子检测的应用。在本章最后介绍了本论文的研究目的、意义和主要内容。第二章为单分子流式检测仪的研制,主要内容包括:1)研制仪器所需主要零部件的选购与功能介绍;2)仪器光路系统、液流系统和检测系统的设计;3)进样器和特殊安装部件的设计与加工;4)仪器在AutoCAD软件中的模拟搭建,确定各个光学元件之间的相对位置以及光学中心的高度;5)信号采集和数据处理软件的介绍,为后续的仪器操作及调试工作提供保障;6)根据各个系统的设计与模拟完成单分子流式检测仪的组装。第三章为单分子流式检测仪的调试与性能分析。仪器的调试工作,主要包括光路校准、流速调节以及数据采集参数的优化。对仪器的性能进行了考察,实验结果表明自行研制的单分子流式检测仪达到了单分子水平的检测,具有良好的重现性和稳定性,而且能够分辨不同大小的DNA片断,即具有较好的分辨率。本工作的主要创新点:(1)结合激光诱导荧光和流体聚焦技术,研制出一台单分子流式检测仪,成功地实现对单个DNA片断和单个藻红蛋白的检测。(2)单分子流式检测仪成功地应用于DNA片断长度的测定,与凝胶电泳分离相比,分析速度和灵敏度分别提高一百和十万倍。(3)与单分子荧光显微术相比,流式分析将固定的标本台改为流动的单分子悬液,大大提高了检测速度与统计精确性,更加适合生物样品的快速、超高灵敏分析。单分子流式检测仪除了可以应用于蛋白质的超高灵敏检测和DNA片断长度的测定,还可以对单个病毒、细菌、亚细胞器、细胞等生物颗粒的生化特性进行检测,也可实现毛细管电泳分离的超高灵敏检测,与液相芯片结合实现多组分的同时检测等,所以单分子流式检测仪将在生命科学领域得到重要应用。
论文目录
相关论文文献
- [1].单分子荧光共振能量转移数据处理的优化算法[J]. 物理学报 2017(11)
- [2].定量单分子检测研究进展[J]. 中国科学:化学 2017(10)
- [3].基于裂结技术的单分子化学反应研究进展综述[J]. 物理化学学报 2019(08)
- [4].电场操控单分子荧光特性的研究进展[J]. 激光与光电子学进展 2016(02)
- [5].近年细胞单分子研究的重要进展[J]. 生命科学 2008(01)
- [6].微腔中单分子对荧光共振能量转移光谱学的理论研究[J]. 光学学报 2009(04)
- [7].单分子检测在生物学和药理学研究中的应用[J]. 生命的化学 2008(01)
- [8].非润湿单分子成膜驱油技术研究与应用[J]. 内江科技 2008(10)
- [9].单分子力谱测量方法及其在生物学中的应用[J]. 核技术 2012(01)
- [10].单分子分析方法研究的进展[J]. 焦作大学学报 2008(04)
- [11].单分子体系发射光子统计[J]. 科学通报 2013(02)
- [12].细胞膜表面单分子事件的实时观察[J]. 生命科学 2008(01)
- [13].北京大学发展单分子检测新技术[J]. 化学分析计量 2014(04)
- [14].单分子计数方法研究进展[J]. 化学分析计量 2008(05)
- [15].原子力显微镜单分子力谱研究生物分子间相互作用[J]. 生命科学 2008(01)
- [16].单分子科学前沿—监测、操纵与表征[J]. 实验室科学 2012(01)
- [17].一种高精度的荧光单分子纳米级定位算法[J]. 纳米技术与精密工程 2010(05)
- [18].生物过程化学机制的单分子荧光探测[J]. 生命科学 2008(01)
- [19].高性能稀土单分子磁体[J]. 人工晶体学报 2019(12)
- [20].基于原子力显微镜的单分子力谱在生物研究中的应用[J]. 应用化学 2012(12)
- [21].单分子磁环最新进展及研究展望[J]. 无机化学学报 2019(11)
- [22].软物质实验方法前沿:单分子操控技术[J]. 物理学报 2016(18)
- [23].单分子电泳:纳米孔道电化学的新认识[J]. 色谱 2020(09)
- [24].活细胞单分子荧光标记——点亮生命微观世界的繁星[J]. 生命世界 2015(12)
- [25].“单分子油膜测分子大小”实验探究[J]. 大学物理实验 2015(06)
- [26].一种改进型单分子操纵装置及其应用[J]. 物理学报 2008(06)
- [27].单分子结的构筑及分子电导性质的测试[J]. 物理化学学报 2012(10)
- [28].外电场操控单分子的偶极取向极化特性研究[J]. 物理学报 2019(12)
- [29].单分子ELISA技术检测的临床应用[J]. 临床检验杂志 2018(04)
- [30].聚合物单分子力谱的研究进展[J]. 高等学校化学学报 2012(05)