苜蓿皂苷调节大鼠胆固醇代谢的机制研究

论文摘要

高脂血症可导致动脉粥样硬化,继而引起冠心病、脑卒中、心肌梗死等病症,所以控制高脂血症的发生对于预防心脑血管疾病有着重要意义。目前常用的他汀类调血脂药物还有些不尽如人意的地方。因此,从植物中寻找具有降血脂作用的天然化合物,并研究其作用机理是近年来的一个研究热点。苜蓿皂苷具有调节脂质代谢,降低机体胆固醇含量等生物活性,但是对其调节脂类代谢的机理研究并不多。本文对比研究了不同高脂饲料建立高脂血症大鼠模型的效果以及灌胃苜蓿皂苷对高脂血症大鼠体重、血清相关指标、肝脏系数、胆固醇合成与代谢相关酶活性及其mRNA相对表达量的影响,并探讨了苜蓿皂苷调节大鼠机体胆固醇代谢的作用机理。主要结果如下:试验一:比较研究了两种不同配方的高脂饲料的建模效果。选用SD雄性大鼠30只（200±14.27g）,随机分为3组,分别饲喂基础饲料（C组）、高脂饲料Ⅰ（Ⅰ组）和高脂饲料Ⅱ（Ⅱ组）共4周,每周测定体重一次,于第三周末和第四周末测定大鼠血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量。结果表明:高脂饲料Ⅰ组与C组比较,体重显著增加（P<0.05）,TC水平极显著升高（P<0.01）,HDL-C和LDL-C水平显著升高（P<0.05）,建模效果优于高脂饲料Ⅱ组。结论:采用高脂饲料Ⅰ饲喂大鼠可在4周内建立稳定的高脂血症大鼠模型。试验二:研究苜蓿皂苷调节大鼠胆固醇代谢的机制。选用SD雄性大鼠48只（200±18.38g）,随机分为6组,正常对照组A,高脂模型组B,苜蓿皂苷预防组C,苜蓿皂苷治疗组D,人参皂苷预防组E和人参皂苷治疗组F,试验期8周。正常对照组饲喂基础饲料,其余各组均饲喂高脂饲料,其中C、E组从第1周开始分别灌胃苜蓿皂苷和人参皂苷,D、F组从第5周开始分别灌胃苜蓿皂苷和人参皂苷。以人参皂苷处理组作为阳性对照,观察试验大鼠体重、肝脏系数、血脂水平和肝脏病理变化情况,并用酶联免疫法（ELISA）和Real-time PCR检测大鼠肝脏羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMG-CoA r）、胆固醇酰基转移酶2（ACAT-2）、大鼠胆固醇7α-羟化酶（CYP7A1）、低密度脂蛋白受体（LDL-R）、胆固醇合成急性调节蛋白（StAR）、固醇调节元件结合蛋白（SREBP-2）蛋白及mRNA表达情况。结果表明:（1）苜蓿皂苷可以显著降低高脂模型大鼠体重、肝脏系数、血清TC和LDL-C水平及改善肝脏脂化程度（P<0.05）。（2）苜蓿皂苷可以显著提高CYP7A1、LDL-R、SREBP-2的蛋白及mRNA表达;显著下调ACAT-2的蛋白及mRNA表达（P<0.05）。结论:苜蓿皂苷通过促进CYP7A1、LDL-R、SREBP-2和抑制ACAT-2的蛋白及mRNA表达,增加肝脏胆固醇的代谢外排和抑制胆固醇合成吸收,进而起到对高脂血症的预防和治疗作用。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 具有降脂作用的植物及其主要活性成分
• 1.2 苜蓿皂苷的理化性质
• 1.2.1 分类与结构
• 1.2.2 理化性质
• 1.2.3 提取工艺
• 1.2.4 含量测定
• 1.3 苜蓿皂苷的主要生物学功能
• 1.3.1 对动物生产性能的影响
• 1.3.2 降低机体胆固醇作用
• 1.3.3 抗氧化，促免疫作用
• 1.3.5 抗菌消炎作用
• 1.3.6 其他方面作用
• 1.4 苜蓿皂苷降低机体胆固醇含量的机理研究
• 1.4.1 阻止胃肠部外源性胆固醇的吸收
• 1.4.2 阻断肠肝循环
• 1.4.3 降低血清中胆固醇含量
• 1.4.4 促进非受体途径胆固醇代谢
• 1.4.5 降低 HMG—CoA 还原酶与提高胆固醇 7α 一羟化酶的活性
• 1.4.6 其他
• 1.5 展望
• 2 引言
• 3 试验一：不同高脂饲料建立高脂血症大鼠模型的对比研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验材料
• 3.1.2 试验动物及试验设计
• 3.1.3 指标测定
• 3.1.4 统计分析
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 不同高脂饲料对大鼠体重的影响
• 3.2.2 不同高脂饲料对第三周末大鼠血清相关指标的影响
• 3.2.3 不同高脂饲料对第四周末大鼠血清相关指标的影响
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 4 试验二：苜蓿皂苷调控大鼠机体胆固醇代谢的机理研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试验材料
• 4.1.2 主要试剂盒及试剂
• 4.1.3 主要仪器设备
• 4.1.4 试验动物
• 4.1.5 试验动物分组与饲喂
• 4.1.6 血液及组织标本的采取
• 4.2 指标测定
• 4.2.1 一般指标
• 4.2.2 病理组织学检查
• 4.2.3 关键酶及蛋白水平测定
• 4.2.3.1 测定指标
• 4.2.3.2 测定原理
• 4.2.3.3 样本处理及要求
• 4.2.3.4 操作步骤
• 4.2.3.5 注意事项
• 4.2.3.6 计算
• 4.2.4 血清指标测定
• 4.2.5 关键酶mRNA 相对表达量测定
• 4.2.5.1 大鼠肝脏总RNA 提取
• 4.2.5.2 总RNA 的质量检测
• 4.2.5.3 反转录
• 4.2.5.4 目的基因的引物设计与合成
• 4.2.5.5 荧光定量PCR（real-time PCR）
• 4.2.6 统计分析
• 4.3 试验结果
• 4.3.1 苜蓿皂苷对大鼠体重和肝脏系数的影响
• 4.3.2 大鼠肝脏组织病理观察结果
• 4.3.2.1 肉眼观察结果
• 4.3.2.2 光镜观察结果
• 4.3.3 苜蓿皂苷对大鼠血清相关指标的影响
• 4.3.4 苜蓿皂苷对大鼠肝脏胆固醇代谢相关酶蛋白表达量的影响
• 4.3.4.1 苜蓿皂苷对大鼠肝脏HMG-CoAr 和ACAT-2 蛋白表达量的影响
• 4.3.4.2 苜蓿皂苷对大鼠肝脏 CYP7A1 和 LDL-R 蛋白表达量的影响
• 4.3.4.3 苜蓿皂苷对大鼠肝脏StAR 和SREBP-2 蛋白表达量的影响
• 4.3.5 苜蓿皂苷对大鼠肝脏胆固醇代谢相关酶 mRNA 表达的影响
• 4.3.5.1 苜蓿皂苷对大鼠肝脏HMG-CoAr 和ACAT-2 mRNA 表达的影响
• 4.3.5.2 苜蓿皂苷对大鼠肝脏 CYP7A1 和 LDL-R mRNA 表达的影响
• 4.3.5.3 苜蓿皂苷对大鼠肝脏StAR 和SREBP-2 mRNA 表达的影响
• 4.4 讨论
• 4.4.1 苜蓿皂苷对大鼠体重的影响
• 4.4.2 苜蓿皂苷对大鼠肝脏的影响
• 4.4.3 苜蓿皂苷对大鼠血清指标的影响
• 4.4.4 苜蓿皂苷对大鼠肝脏胆固醇代谢相关酶的蛋白和mRNA 表达的影响
• 4.5 小结
• 5 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 英文摘要