首页> 正文

严重烧伤大鼠骨骼肌凋亡及胰岛素治疗对其作用的研究

2020-12-07阅读(851)

严重烧伤大鼠骨骼肌凋亡及胰岛素治疗对其作用的研究

论文摘要

目的:严重烧伤后骨骼肌萎缩可引起许多并发症,严重影响患者的治疗、康复及预后。我们以前的研究表明,骨骼肌蛋白降解增强是烧伤后骨骼肌萎缩的重要原因。然而最近的研究表明,细胞凋亡通路的激活在骨骼肌萎缩过程中具有重要作用并且发生在骨骼肌蛋白降解之前,而且线粒体功能失常和细胞凋亡通路失调已被认为是老年因素等引起的骨骼肌萎缩发生、发展的机制。本研究拟进一步探讨严重烧伤后骨骼肌凋亡的发生、成肌细胞增殖活性的改变以及它们与骨骼肌萎缩的关系;烧伤后骨骼肌凋亡的可能机制;胰岛素对烧伤后骨骼肌凋亡的抑制作用及其机制。为了避免热力损伤对骨骼肌的直接作用,并能更好地理解烧伤后全身系统反应对骨骼肌的作用,我们选取远离烧伤部位的胫骨前肌作为研究对象。方法:雄性Wistar大鼠180只,随机分为3组:（1）假伤组;（2）严重烧伤组制作40%TBSA大鼠烫伤模型;（3）烧伤+胰岛素治疗组从烧伤后24小时开始,每隔12小时皮下注射胰岛素1次,持续5天（剂量逐日递增,分别为0.25,0.5,0.75,1.0,1.25 U/100g/次）。于伤后0、1、4、7、10、14天麻醉大鼠,麻醉前夜禁食,腹主动脉抽血并分离切取胫骨前肌及趾长伸肌并称重。胰岛素治疗组取标本时间为胰岛素注射后8分钟。骨骼肌凋亡的超微结构采用透射电镜（TEM）检测;骨骼肌凋亡的原位检测采用TdT酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）;骨骼肌凋亡的定量及血清INF-α、sFas、sFasL水平采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测;血清胰岛素水平采用放射免疫学方法进行检测;血糖水平采用Roche血糖仪进行检测;骨骼肌凋亡相关基因的表达采用实时定量PCR芯片进行检测;骨骼肌中Akt（蛋白激酶B）及磷酸化Akt、Bax、Bcl-2、Apaf-1和caspase-3蛋白表达水平采用Western blot方法进行检测;骨骼肌caspase-3、caspase-8、caspase-9活性水平采用相应试剂盒通过比色法或化学发光法进行检测。结果:1.严重烧伤可引起大鼠体重明显降低,胫骨前肌和趾长伸肌的肌肉重量下降、肌肉重量与体重比值减小。2.严重烧伤后大鼠胫骨前肌成肌细胞增殖活性（PCNA表达）明显降低,但经线性相关分析未发现与肌肉重量有显著相关。3.严重烧伤后大鼠胫骨前肌存在肌核凋亡现象,经线性相关分析,发现胫骨前肌凋亡指数与肌肉重量呈显著负相关。4.严重烧伤后血清TNF-α迅速升高并逐渐下降,随后血清sFasL与sFas比值升高。5.严重烧伤后死亡受体通路中的促凋亡信号分子,包括TNF-α、FasL、Tnfrsfla、Tnfrsf1b、Tnfsf6、Fadd、caspase-3、caspase-6和caspase-8均表达增高或活性增强。6.严重烧伤后线粒体通路中的促凋亡分子Bax、Bid、Apaf-1和caspase-9表达或活性增强,而抗凋亡分子Bnip1表达下调。另外抗凋亡基因Bcl211和Mcl1等表达也上调。7.严重烧伤后其它信号通路中的促凋亡分子,如Gadd45a、Cidea、Dapk1表达上调,同时部分抗凋亡基因ARC/Nol-3、IL-10、prokineticin-2也表达上调。8.胰岛素治疗可部分抑制烧伤引起的胫骨前肌凋亡增加。9.胰岛素治疗后烧伤大鼠胫骨前肌胰岛素信号通路中的核心信号蛋白Akt磷酸化水平显著升高,血清胰岛素水平升高。10.胰岛素治疗后烧伤大鼠血清TNF-α及sFasL和sFas比值下降。11.胰岛素治疗后,烧伤大鼠骨骼肌促凋亡分子包括TNF受体超家族中的Traf1,Bcl-2家族中的Bid3,caspase家族中的caspase-3和caspase-6,CARD家族中的Card6、Dapk1和Cidea基因/蛋白表达或活性水平下降。同时抗凋亡基因Prok2表达也下调。结论:1.严重烧伤后存在骨骼肌核凋亡现象,它是烧伤后骨骼肌萎缩的重要原因。2.严重烧伤后骨骼肌成肌细胞增殖活性下降,但它可能不是骨骼肌萎缩的主要原因。3.严重烧伤后骨骼肌凋亡的机制包括外源性通路（死亡受体介导的细胞凋亡信号通路）、内源性通路（线粒体介导的细胞凋亡信号通路）以及其它信号通路中与凋亡相关的分子的活化。4.胰岛素治疗可部分抑制烧伤引起的胫骨前肌凋亡增加,其机制是通过激活胰岛素信号通路来调节包括死亡受体信号通路分子、caspases、Bcl-2家族调节蛋白及其它与凋亡相关的信号分子,从而达到抑制烧伤后骨骼肌凋亡的目的。

论文目录

  • 英文缩略词表
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 第一部分 严重烧伤大鼠骨骼肌凋亡、成肌细胞增殖及其与骨骼肌萎缩关系的研究
  • 前言
  • 材料与方法
  • 一.主要试剂
  • 二.主要仪器
  • 三.主要试剂配制
  • 四.实验动物与分组
  • 五.标本采集与处理
  • 六.指标检测与方法
  • 七.统计学处理
  • 实验结果
  • 一.严重烧伤后大鼠体重及肌肉重量的变化
  • 二.严重烧伤后大鼠胫骨前肌组织的 HE 染色观察
  • 三.严重烧伤后大鼠胫骨前肌成肌细胞 PCNA 表达的变化
  • 四.严重烧伤后大鼠胫骨前肌核凋亡的变化
  • 五.严重烧伤后胫骨前肌凋亡、成肌细胞增殖指数与胫骨前肌重量的相关性分析
  • 讨论
  • 一.严重烧伤后骨骼肌萎缩及其危害
  • 二.严重烧伤后骨骼肌萎缩的机制
  • 本部分小结
  • 参考文献
  • 第二部分 严重烧伤大鼠骨骼肌凋亡机制的实验研究
  • 前言
  • 材料与方法
  • 一.主要试剂
  • 二.主要仪器
  • 三.主要试剂配制
  • 四.实验动物与分组
  • 五.指标检测与方法
  • 六.统计学处理
  • 实验结果
  • 一.严重烧伤大鼠血清 sFas、sFasL 和 TNF-α的变化
  • 二.严重烧伤大鼠胫骨前肌凋亡相关基因 mRNA 水平的变化
  • 三.严重烧伤大鼠胫骨前肌部分促凋亡和抗凋亡蛋白表达水平的变化
  • 四.严重烧伤大鼠胫骨前肌主要 caspases 活性的变化
  • 讨论
  • 一.死亡受体介导的凋亡信号通路是烧伤后骨骼肌凋亡的一个重要原因
  • 二.线粒体凋亡通路是烧伤后骨骼肌凋亡的又一重要原因
  • 三.Caspase-3和 caspase-6是烧伤后骨骼肌凋亡的重要执行蛋白
  • 四.其它细胞信号通路中一些凋亡相关的分子也参与了烧伤后骨骼肌凋亡的发生
  • 本部分小结
  • 参考文献
  • 第三部分 胰岛素抗烧伤后骨骼肌凋亡及其机制的研究
  • 前言
  • 材料与方法
  • 一.主要试剂及仪器
  • 二.实验动物与分组
  • 三.烧伤模型制作和胰岛素治疗方案
  • 四.标本采集与处理
  • 五.指标检测与方法
  • 六.统计学处理
  • 实验结果
  • 一.烧伤及胰岛素治疗对血糖及血清胰岛素水平的影响
  • 二.胰岛素对烧伤后大鼠体重和骨骼肌重量的变化
  • 三.胰岛素治疗对烧伤大鼠骨骼肌凋亡的影响
  • 四.胰岛素治疗对烧伤大鼠血清凋亡配体的影响
  • 五.胰岛素对烧伤后胫骨前肌凋亡相关基因 mRNA 转录水平的影响
  • 六.胰岛素对烧伤后胫骨前肌凋亡相关蛋白表达水平的影响
  • 七.胰岛素对烧伤后胫骨前肌 caspase-3蛋白表达及活性水平的影响
  • 讨论
  • 一.胰岛素治疗对烧伤后骨骼肌凋亡的作用
  • 二.胰岛素信号通路蛋白及其作用
  • 三.胰岛素可调节促凋亡信号分子而抑制烧伤后骨骼肌凋亡
  • 本部分 小结
  • 参考文献
  • 全文总结
  • 文献综述
  • 文献综述一
  • 参考文献
  • 文献综述二
  • 参考文献
  • 攻读博士学位期间发表论文情况
  • 致谢

    • 相关论文文献

    • [1].成批严重烧伤伤员转运方案的临床实践分析[J]. 河南大学学报(医学版) 2019(02)
    • [2].严重烧伤后血小板计数变化的临床意义[J]. 河南大学学报(医学版) 2019(03)
    • [3].《成批严重烧伤伤员的转运方案(2016版)》解读[J]. 创伤与急危重病医学 2016(06)
    • [4].《成批严重烧伤伤员的转运方案(2016版)》解读[J]. 创伤与急危重病医学 2017(01)
    • [5].上海交通大学医学院附属第九人民医院李青峰教授项目获2016年度国家科技进步奖二等奖[J]. 上海交通大学学报(医学版) 2017(02)
    • [6].限制性液体管理策略防治严重烧伤早期肺脏并发症[J]. 第三军医大学学报 2017(16)
    • [7].手术前乱吃东西,屁股会着火?[J]. 恋爱婚姻家庭.养生 2017(01)
    • [8].47岁教师两次谋杀智障女儿[J]. 恋爱婚姻家庭.纪实 2017(03)
    • [9].一头鲸的死[J]. 意林 2017(16)
    • [10].成批严重烧伤伤员的转运方案(2016版)[J]. 创伤与急危重病医学 2016(06)
    • [11].严重烧伤事故批量患者的救治[J]. 中华卫生应急电子杂志 2017(03)
    • [12].雄激素与严重烧伤高分解代谢[J]. 西北国防医学杂志 2013(06)
    • [13].严重烧伤合并吸入性损伤患者的临床护理[J]. 中国医药指南 2014(03)
    • [14].小剂量肝素在严重烧伤早期救治中的应用[J]. 河南大学学报(医学版) 2019(04)
    • [15].严重烧伤伴休克患者远程转运治疗及护理[J]. 灾害医学与救援(电子版) 2015(03)
    • [16].严重烧伤合并吸入性损伤的呼吸道护理管理110例分析[J]. 中外医学研究 2013(26)
    • [17].严重烧伤合并吸入性损伤52例患者的抢救与护理体会[J]. 中国美容医学 2012(08)
    • [18].严重烧伤后脑损害的磁共振成像研究与展望[J]. 中国CT和MRI杂志 2017(04)
    • [19].严重烧伤及吸入性损伤后酸碱失衡的动态分析[J]. 中外医疗 2017(25)
    • [20].严重烧伤合并精神障碍的救治及心理追踪一例[J]. 中华危重症医学杂志(电子版) 2015(01)
    • [21].严重烧伤后中性粒细胞、巨噬细胞功能的变化及其影响[J]. 中外医疗 2014(11)
    • [22].小儿严重烧伤并发脑水肿的观察与护理[J]. 山西医药杂志(下半月刊) 2010(02)
    • [23].血必净注射液治疗严重烧伤合并内毒素血症的临床疗效观察[J]. 重庆医学 2010(12)
    • [24].严重烧伤急性期患者自控静脉镇痛的护理观察[J]. 中国临床护理 2010(05)
    • [25].严重烧伤21例预防并发ARDS的护理[J]. 中国误诊学杂志 2009(02)
    • [26].严重烧伤并发肠系膜上动脉综合征6例病因分析及护理[J]. 齐鲁护理杂志 2008(14)
    • [27].严重烧伤建立人工气道后气道梗阻识别与急救对策研究[J]. 中华损伤与修复杂志(电子版) 2017(02)
    • [28].血必净注射液对严重烧伤大鼠脏器功能及血清炎症因子水平的影响[J]. 中成药 2016(04)
    • [29].胰岛素泵在严重烧伤合并胰岛素抵抗患者治疗中的应用[J]. 创伤外科杂志 2010(02)
    • [30].小儿严重烧伤并发脑水肿的临床治疗[J]. 吉林医学 2010(27)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  

    严重烧伤大鼠骨骼肌凋亡及胰岛素治疗对其作用的研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5