论文摘要
脑血管病严重威胁着人类的健康和生命,而缺血性脑血管病约占各类中风的80%。高等动物脑内突触传递的可塑性是近30年来神经科学研究的热点,而关于其机理的研究,很多学者从不同角度进行了探讨,但是对于针刺调节突触的可塑性方面的研究非常缺乏。针刺作为一种外源性信号,是临床卓有成效的缺血性脑损伤康复手段,其作用机制是否与调节突触传递效能以调动机体的自我修复系统,从而促进脑可塑性的形成有关呢?本文从以下几个方面进行了研究。1.文献研究本部分就古代中医学关于中风的命名、病因病机以及针灸治疗中风的古代记载方面进行了论述,从而对中风的古代文献研究背景进行了深入的认识。近年来对于脑血管病的研究中发现卒中后恢复阶段,突触在结构和功能上可以进行自我修复和重建。因此本文就突触可塑性及其有关物质进行综述,为进一步研究针刺治疗脑缺血损伤机制奠定理论基础。2.实验研究本研究观察了脑缺血后不同时间段大鼠的学习记忆能力、突触超微结构的变化及突触素P38和GAP-43表达的动态变化,探讨针刺督脉经穴“百会”、“大椎”干预其变化的时效关系。2.1方法2.1.1选用健康雄性Wistar大鼠250只,随机分为假手术组（A）、缺血组（B）、缺血+电针组（C）、缺血+DL-AP5组（D）、缺+DL-AP5+电针组（E）五组,每组又分为1h、3h、6h、12h、2w五个时间段。动物模型复制沿用以往的电凝大脑中动脉法,采用热凝闭大鼠大脑中动脉致局灶性脑缺血模型。其中假手术组只作手术暴露大鼠大脑中动脉,不予凝闭。模型复制完成后,分别将D组和E组大鼠在脑立体定位仪上进行侧脑室注射NMDAR拮抗剂DL-AP5。对于C组和E组,取督脉经穴“百会（GV20）”、“大椎（GV14）”穴进行针刺,后接电针30min。2.1.2 Y迷宫测试成绩:对于C和E,先进行电针治疗,治疗后分3h、6h、12h、2w四个时间段进行Y迷宫测试,记录不同时间段各组大鼠的成绩。2.13突触超微结构:12h、2w后,随机取25组大鼠每组各3只左心室灌注取材。参数的观察采用JEM一1200EX透射电镜,底片放大1.5万倍印相,进行电镜观察缺血区皮层突触界面参数突触间隙宽度、PSD厚度和突触界面曲率的变化及电针对其影响。2.1.4突触素P38的免疫阳性表达:250只大鼠于术后1h、3h、6h、12h、2w每个时间段分别进行左心室灌注取材后,采用免疫组化方法检测缺血区周围皮层突触素P38的免疫阳性表达及电针的累加效应情况。2.1.5 GAP-43免疫阳性表达:250只大鼠于术后1h、3h、6h、12h、2w每个时间段分别进行左心室灌注取材后,采用免疫组化方法检测缺血区周围皮层GAP-43的免疫阳性表达及电针的累加效应情况。2.2结果2.2.1 Y迷宫测试成绩脑缺血后3h,各组大鼠学习记忆能力下降,分别与假手术组比较均有显著性意义（P＜0.01）。随着脑缺血时间延长至6h时,学习记忆功能反而较3h下降。脑缺血时间的延长至12h时,大鼠学习记忆能力有所提高。随着脑缺血时间继续延长至2w时,各组大鼠受到刺激后从非安全区跑至安全区所用时间明显减少,C组大鼠所用时间已接近A组,表明局灶性脑缺血大鼠已经趋向于康复。其中B组优于D组（P＜0.01）,C组优于B组（P＜0.01）,E组优于D组（P＜0.01）。2.2.2突触超微结构2.2.2.1突触间隙宽度和PSD厚度方面:B组12h、2w下降均较为明显,与A组比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;但是均优于同期D组,分别比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;与E组比较,12h差异无统计学意义（P＞0.05）,2w差异则有显著性意义（P＜0.01）。C组明显优于同期B组,12h和2w均有显著性意义（P＜0.01）;也优于D组和E组,分别比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;但低于A组,分别比较差异均有显著性意义（P＜0.01）。D组明显低于同期A组,分别比较差异均有显著性意义（P＜0.01）。E组优于同期D组,分别比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;但始终低于A组（P＜0.01）。2.2.2.2突触界面曲率方面:B组12h、2w均下降,与A组比较差异均有显著性或非常显著性意义（12h,P＜0.01;2w,P＜0.05）;但是均优于同期D组,分别比较差异均有显著性或非常显著性意义（12h,P＜0.01;2w,P＜0.05）;与E组比较,12h与2w差异均无统计学意义（P＞0.05）。C组明显优于同期B组,差异均有显著性或非常显著性意义（12h,P＜0.01;2w,P＜0.05）;也优于D组（12h和2wP＜0.01）,优于E组（12h,P＜0.01;2w,P＜0.05）;但低于A组（12h和2wP＜0.01）。D组明显低于A组（12h和2wP＜0.01）。E组优于同期D组,分别比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;但始终低于A组（P＜0.01）。2.2.3突触素P38和GAP-43的免疫阳性表达其中假手术组表达很少,C组表达最多。2.2.3.1大鼠脑缺血后1h,大鼠突触素P38和GAP-43的免疫阳性表达稍下降:2.2.3.1.1对于P38,B组高于A组和D组,分别与此二组比较差异均有显著性意义（P＜0.01）:但是低于C组和E组,分别与此二组比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;C组平均每个高倍视野的阳性细胞数高于其他各组,分别比较差异均有极显著性意义（P＜0.001）;D组与A组差异无统计学意义（P＞0.05）;E组高于D组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）。2.2.3.1.2对于GAP-43,B组高于A组、D组和E组,但是低于C组。B组分别与A组和C组及D组比较差异均有显著性意义（P＜0.01）,但是与E组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;C组高于其他各组,分别比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;D组高于A组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）;E组高于D组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）。2.2.3.2随脑缺血时间延长至3h时,大鼠P38和GAP-43免疫阳性细胞表达较1h增多:B组高于A组和D组,分别与此二组比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;但是低于C组,两者比较差异也有显著性意义（P＜0.01）;但与E组比较差异则无统计学意义（P＞0.05）;C组高于其他各组,分别比较差异均有极显著性意义（P＜0.001）;D组高于A组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）;E组高于D组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）。2.2.3.3大鼠脑缺血后,随时间延长至6h时,大鼠突触素P38和GAP-43免疫阳性细胞的表达未见增加,反而降低。B组高于A组和D组,分别与此二组比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;但是低于C组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）;但与E组比较则差异则无统计学意义（P＞0.05）;C组平均每个高倍视野的阳性细胞数明显高于其他各组,分别比较差异均有极显著性意义（P＜0.001）;D组高于A组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）;E组高于D组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）。2.2.3.4大鼠脑缺血后,随时间的继续延长至12h时,大鼠突触素P38和GAP-43免疫阳性细胞的表达较6h明显增加。B组高于A组和D组,分别与此二组比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;但是低于C组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）;但与E组比较差异则无统计学意义（P＞0.05）;C组明显高于其他各组,分别比较差异均有极显著性意义（P＜0.001）;D组高于A组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）;E组高于D组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）。2.2.3.5大鼠脑缺血后,随时间再延长到2周时,大鼠突触素P38和GAP-43免疫阳性细胞的表达未见到继续再增加,反而降低至3h左右的水平。可见,P38和GAP-43的免疫阳性细胞表达并不是随着时间的延长一直增加,而是一直在变化着,但是各组的P38和GAP-43的免疫阳性细胞表达虽有降低,但是仍然高于A组,说明受到创伤的脑组织仍然不能恢复到正常水平。B组平均每个高倍视野表达的免疫阳性细胞数高于A组和D组,分别与此二组比较差异均有显著性意义（P＜0.01）;但与E组比较差异则无统计学意义（P＞0.05）;C组明显高于其他各组,分别比较差异均有极显著性意义（P＜0.001）;D稍高于A组,两者比较差异仍然有显著性意义（P＜0.01）;E组高于D组,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）。2.4结论2.4.1凝闭大脑中动脉致局灶性脑缺血动物模型,目前是动物实验研究中较为成功的模型之一,经过本实验研究证实这一造模方法可靠、可行。2.4.2大鼠脑缺血损伤后,学习记忆能力下降,可能与缺血后突触结构破坏、数量减少有关,电针可以改善缺血大鼠的学习记忆能力,可能与电针促进了突触的重建和突触联系有关。2.4.3大鼠脑缺血损伤后,其缺血区周围皮层突触界面结构参数发生了改变,表现为突触后致密物厚度下降,突触间隙宽度减小,突触界面曲率降低,导致其学习记忆能力下降,而电针能够提高缺血大鼠的学习记忆能力,可能与电针增加了突触后致密物厚度、增大了突触间隙宽度、升高了突触界面曲率有关。2.4.4大鼠脑缺血损伤后,其缺血区周围皮层中突触素P38和GAP-43的阳性表达增加,可能与脑缺血后突触结构破坏,突触前、后膜代偿,新的突触生成以建立新的突触联系有关。而电针可以提高缺血大鼠的缺血区周围皮层中突触素P38和GAP-43的阳性表达,促进突触重建,增强突触传递的效能,有利于缺血大鼠的自我恢复。2.4.5本实验研究结果表明,缺血+DL-AP5+电针组大鼠PSD厚度、突触间隙宽度及突触界面曲率均分别显著大于缺血+DL-AP5组,提示电针可在一定程度上逆转NMDAR拮抗剂DL-AP5所引起的PSD厚度、突触间隙宽度及突触界面曲率的降低,增强了突触的传递效能,从而促进脑功能的恢复。2.4.6由Y迷宫测试成绩、突触超微结构及突触素P38和GAP-43的阳性表达结果来看,突触存在可塑性,本实验研究结果表明,电针可提高缺血大鼠的学习记忆能力,促进突触重塑,增加P38和GAP-43的阳性表达,增强了突触的传递效能,从而促进缺血损伤的尽快恢复。2.4.7实验结果表明,脑缺血损伤后6h,突触间隙宽度、突触后致密物厚度和突触界面曲率相较于3h反而减小,突触素P38和GAP-43的阳性表达降低,而此时缺血大鼠的学习记忆能力也下降,说明学习记忆能力与突触的可塑性密切相关。综上所述,我们认为针刺促进了脑缺血后突触重建和突触联系,这可能是针刺治疗缺血性脑损伤的作用机制之一。
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- [1].利肺片对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影响[J]. 中成药 2020(02)
- [2].慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的建立与评价[J]. 中国实验动物学报 2020(02)
- [3].国内外大鼠和小鼠微生物、寄生虫检测标准的比较[J]. 实验动物与比较医学 2020(02)
- [4].武夷岩茶对酒精性肝损伤大鼠的护肝作用[J]. 武夷学院学报 2020(03)
- [5].参芎葡萄糖注射液对大鼠肺动脉高压的治疗作用及其机制[J]. 中国生物制品学杂志 2020(06)
- [6].口服蛋氨酸饲料致大鼠心室重塑的研究[J]. 天津医科大学学报 2020(03)
- [7].腹部推拿对结肠慢传输型便秘大鼠的治疗效果[J]. 新疆医科大学学报 2020(04)
- [8].基于UHPLC-Q-Exactive MS分析鉴定隐丹参酮在大鼠体内的代谢产物[J]. 质谱学报 2020(04)
- [9].针刺对慢性温和刺激大鼠粪便代谢的影响[J]. 针灸临床杂志 2020(07)
- [10].两种不同方法制造简易大鼠挤压伤模型的研究[J]. 宁夏医科大学学报 2020(08)
- [11].酸枣仁水提物对焦虑大鼠症状的改善及其对肠道菌群的影响[J]. 现代食品科技 2019(11)
- [12].早期肠内营养对重症肺炎大鼠免疫功能的影响分析[J]. 中国医学前沿杂志(电子版) 2017(01)
- [13].右美托咪定后处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 临床医学工程 2017(02)
- [14].滨蒿内酯对大鼠实验性变应性鼻炎的疗效及机制[J]. 贵州医科大学学报 2017(01)
- [15].黄连解毒汤对营养性肥胖大鼠的毒性研究[J]. 光明中医 2017(10)
- [16].三七总皂甙对骨折大鼠血管内皮生长因子基因扩增及蛋白表达水平影响的研究[J]. 临床医药文献电子杂志 2017(51)
- [17].小花棘豆中毒对大鼠下丘脑—垂体—卵巢轴α-甘露糖苷酶的影响[J]. 福建农林大学学报(自然科学版) 2016(01)
- [18].法舒地尔对百草枯致大鼠肺纤维化的干预作用[J]. 浙江实用医学 2016(01)
- [19].富血小板血浆对创伤性颅脑损伤大鼠神经功能的保护作用[J]. 吉林大学学报(医学版) 2016(05)
- [20].白虎汤对全身炎症反应综合征大鼠炎症因子的影响[J]. 四川中医 2015(01)
- [21].长期饮用淡化海水对大鼠血脂影响[J]. 中国公共卫生 2015(07)
- [22].辛伐他汀预处理对大鼠神经源性肺水肿的作用及其机制[J]. 中国动脉硬化杂志 2015(10)
- [23].猫捉大鼠[J]. 中小学音乐教育 2020(07)
- [24].西维来司钠对大鼠脑出血保护作用机制的实验研究[J]. 现代养生 2017(10)
- [25].药对藿香-陈皮配伍前后对功能性消化不良大鼠的初步药效学研究[J]. 健康之路 2017(07)
- [26].VND3207药物对中子辐照大鼠脏器指数的影响[J]. 中国原子能科学研究院年报 2016(00)
- [27].韭菜洋葱有助睡眠[J]. 益寿宝典 2017(14)
- [28].毒瘾也“世袭”?雄性大鼠毒瘾遗传给后代[J]. 创新时代 2017(08)
- [29].脉冲射频治疗对带状疱疹后神经痛模型大鼠脊髓背角自噬的影响[J]. 临床麻醉学杂志 2019(12)
- [30].麝香保心丸对高尿酸血症大鼠内皮功能的影响[J]. 中西医结合心脑血管病杂志 2019(23)