Beclin 1在胃癌、乳腺癌和直结肠癌中的表达调控

论文摘要

Beclin 1是哺乳动物中首个被发现的具有调节细胞自我吞噬作用的抑癌基因,在细胞自噬作用的过程中能够调节吞噬泡的形成,并通过结合Bcl-2参与细胞凋亡的调控,实现对肿瘤的抑制功能。本工作通过研究beclin 1在乳腺癌、胃癌和直结肠癌中的表达情况及调控机制,为进一步研究beclin 1基因与肿瘤发生、发展的关系奠定基础。我们首先对60例乳腺癌、胃癌和直结肠癌的组织标本beclin1 mRNA及蛋白表达水平进行了检测,发现beclin 1基因的表达在乳腺癌和胃癌中与癌旁组织表达呈现显著差异,并筛选到19例表达显著下调的标本。同时检测了P53、BRCA1和BRCA2三种蛋白的表达,结果表明beclin 1的mRNA表达水平与BRCA1阳性着色的乳腺癌标本之间存在显著关联。为了阐明影响beclin 1表达可能的调控机制,我们从杂合子缺失、点突变和DNA甲基化修饰三个方面进行了研究。结果表明:①在乳腺癌和胃癌标本中分别存在至少45%和20%的杂和子缺失,且缺失标本与beclin 1的mRNA表达水平呈现显著关联,而在直结肠癌中未发现任何缺失,说明杂合子缺失是乳腺癌和胃癌中beclin 1表达的一种调控机制;②对20例来自乳腺癌组织标本的基因组DNA中beclin 1外显子区分析未发现任何突变,说明beclin 1在乳腺癌中突变发生较为罕见;③生物信息学分析结果提示在beclin 1基因5‘端存在一个CpG岛,横跨启动子至第二个内含子区域,对显著下调的肿瘤标本进行检测发现乳腺癌、胃癌和直结肠癌组织中均存在启动子区域和第二个内含子区域的异常甲基化,且甲基化与belcin 1基因表达相关,用5-aza-dC处理卵巢癌细胞SKOV3,beclin 1基因的表达得到恢复,DNA甲基化对其表达有沉默作用。总之,我们在乳腺癌和胃癌中发现了调控beclin 1表达的两种重要机制:杂合子缺失和DNA甲基化。直结肠癌中除DNA甲基化外可能还存在未知beclin 1表达的调控机制。由于beclin 1在抑制肿瘤发生中起到重要作用,其调控方式的研究有助于为肿瘤的治疗提供新的靶标。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 主要符号对照表
• 第1章 引言
• 1.1 肿瘤研究进展
• 1.1.1 肿瘤的概念和发展历史
• 1.1.2 肿瘤细胞和正常细胞的主要区别
• 1.1.3 肿瘤的分类
• 1.1.4 肿瘤干细胞
• 1.1.5 抗肿瘤作用机制的研究进展
• 1.2 癌基因与抑癌基因
• 1.2.1 癌基因及其功能
• 1.2.2 抑癌基因及其功能
• 1.2.3 癌基因与抑癌基因的相互作用
• 1.2.4 癌基因的表达调控
• 1.2.5 抑癌基因的表达调控
• 1.2.6 DNA 甲基化与肿瘤
• 1.3 BECLIN 1 在细胞的自噬和凋亡中的作用
• 1.3.1 细胞的自噬作用
• 1.3.2 细胞凋亡研究进展
• 1.3.3 Beclin 1 与肿瘤
• 1.4 本研究工作的目的和内容
• 第2章 乳腺癌中BECLIN 1 基因的表达调控研究
• 2.1 引言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 标本来源
• 2.2.2 总RNA 提取和real-time 定量RT-PCR
• 2.2.3 基因组DNA 的提取和real-time 定量PCR
• 2.2.4 突变分析和微卫星多态性分析
• 2.2.5 亚硫酸氢钠修饰基因组后测序检测DNA 甲基化
• 2.2.6 免疫组织化学分析
• 2.2.7 统计分析
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 Beclin 1 基因5’调控区CpG 岛分析
• 2.3.2 Beclin 1 在乳腺癌组织中m RNA 表达水平下调
• 2.3.3 免疫组织化学分析beclin 1 蛋白水平表达
• 2.3.4 Beclin 1 mRNA 表达水平与P53、BRCA1 和BRCA2 表达的关联分析
• 2.3.5 乳腺癌中beclin 1 杂合子缺失研究
• 2.3.6 Beclin 1 基因CpG 岛甲基化分析
• 2.4 讨论
• 第3章 胃癌中BECLIN 1 基因的表达调控研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料和方法
• 3.2.1 标本来源
• 3.2.2 总RNA 提取和real-time 定量RT-PCR
• 3.2.3 免疫组织化学分析
• 3.2.4 杂合子缺失分析
• 3.2.5 亚硫酸氢钠修饰基因组DNA
• 3.2.6 统计分析
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 Beclin 1 在胃癌、癌旁组织中mRNA 表达情况
• 3.3.2 免疫组织化学染色分析beclin 1 蛋白表达情况
• 3.3.3 胃癌组织中beclin 1 的杂合子缺失分析
• 3.3.4 Beclin 1 基因甲基化情况
• 3.4 分析与讨论
• 第4章 直结肠癌中BECLIN 1 基因的表达调控研究
• 4.1 引言
• 4.2 材料和方法
• 4.2.1 组织标本来源
• 4.2.2 组织总RNA 提取及定量RT-PCR
• 4.2.3 免疫组织化学分析
• 4.2.4 定量PCR
• 4.2.5 亚硫酸氢钠测序法检测DNA 甲基化
• 4.2.6 5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理四种肿瘤细胞后对beclin 1 表达的影响
• 4.2.7 统计分析
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 Beclin 1 在直结肠癌中的表达情况
• 4.3.2 免疫组织化学分析癌组织与癌旁组织beclin 1 蛋白表达情况
• 4.3.3 杂合子缺失检测
• 4.3.4 Beclin 15’端CpG 岛甲基化检测
• 4.3.5 5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理卵巢癌细胞后beclin 1 表达回复
• 4.4 分析与讨论
• 第5章 脂连素基因多态性与Ⅱ型糖尿病患者吡格列酮药物反应相关性研究
• 5.1 引言
• 5.2 实验设计与方法
• 5.2.1 病人来源
• 5.2.2 临床试验
• 5.2.3 SNP 基因分型
• 5.2.4 统计分析
• 5.3 结果
• 5.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果