导读:本文包含了软骨方向诱导论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:生长分化因子5,脂肪干细胞,基因转染,质粒
软骨方向诱导论文文献综述
吴磊,刘洋,谭俊峰,孙凯,郑先念[1]（2017）在《生长分化因子5诱导脂肪干细胞向成软骨细胞方向分化的实验研究》一文中研究指出目的通过质粒转染探讨生长分化因子5(GDF-5)诱导大鼠脂肪干细胞向成软骨细胞方向分化的影响。方法选取雄性SD大鼠采用酶消化-密度梯度离心法提取脂肪干细胞行体外培养,并通过流式细胞术鉴定脂肪干细胞。体外培养的脂肪干细胞分3组,即转染组、空质粒组和对照组。转染组采用Lipofectamine~(TM)2000进行脂质体pcDNA3.1(+)/GDF-5重组质粒瞬间转染;空质粒组采用空质粒pcDNA3.1(+);对照组只加入等量脂质体。转染后观察各组细胞形态。同时,通过免疫组织化学、免疫荧光检测培养2周后Ⅱ型胶原表达水平,通过甲苯胺蓝染色检测2周后蛋白聚糖表达水平。结果转染2周后,空质粒组、对照组细胞形态未见明显变化,转染组长梭形的细胞明显向成软骨的多角形方向变化。Ⅱ型胶原经免疫组织化学染色,转染组可见棕黄色染色,空质粒组、对照组无明显染色;免疫荧光结果显示,转染组细胞呈亮绿色,空质粒组、对照组均未见明显染性着色。蛋白聚糖经甲苯胺蓝染色后转染组细胞呈蓝染,空质粒组、对照组均未见明显染性着色。结论pcDNA3.1(+)/GDF-5转染脂肪干细胞能显着增加Ⅱ型胶原、蛋白聚糖的表达,促进脂肪干细胞向成软骨细胞方向分化。(本文来源于《生物医学工程与临床》期刊2017年04期）
郑育亮,张志光[2]（2015）在《诱导多能干细胞成软骨方向分化的研究进展》一文中研究指出诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)是指通过一定的方法,将某些特定的转录因子转入到已分化的成体细胞,使其重编程为形态和功能上类似于胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESCs)的一类细胞。由于其避开了既往胚胎干细胞研究在细胞来源和伦理道德方面等问题,从一诞生起就迅速引发了科学界的强烈兴趣,并在再生医学、疾病建模及新型药物筛选方面展现出极大的优势。软骨由于其组织结构的特异性,缺乏神经血管分布,出现局部破坏和缺损后难以自行修复,常造成不同程度的关节功能障碍乃至整个关节功能的丧失。i PS技术的发展给软骨缺损的修复提供新的途径。本文就近年来有关i PS细胞技术及其在软骨组织工程方面的新研究进展及应用作一综述。(本文来源于《中华老年口腔医学杂志》期刊2015年04期）
李波[3]（2015）在《釉结在牙齿发育中作用的探究及iPS细胞向软骨方向诱导分化的体外研究》一文中研究指出牙齿的发育是一个长期、复杂的连续过程，包括牙胚的发生(initiation)、牙胚形成(morphogenesis)、细胞分化(differentiation)、牙齿萌出(eruption)等几个阶段。釉结是牙胚发育进入帽状期和钟状期出现的暂时性的结构，在牙发育后期消失。釉结位于牙胚中央，研究表明，釉结是调节牙早期形态发生的信号中心。因此，本实验旨在探究釉结在牙齿发生发育过程中的重要作用，利用小鼠的牙胚上皮组织与牙胚间充质组织重组移植的方法证实釉结在牙齿形成大小以及牙尖数量上起着至关重要的作用，随后用原位杂交方法追踪釉结的位置。本实验分别将完整的牙胚上皮组织、去掉釉结部分的牙胚上皮组织釉结组织与牙胚间充质组织重组，进行小鼠肾包膜移植体内实验以及体外原位杂交实验，体内移植实验结果表明，缺少釉结的重组实验组形成牙齿的大小比其他实验组小以及牙尖数量明显少。体外原位杂交实验结果表明：即使去掉釉结的上皮部分，在随后的发育过程中也会再生出新的釉结。以上实验结果说明，釉结确实在牙齿发生发育过程中是必不可少的一个部分。由于缺乏合适的种子细胞，在软骨缺损的临床治疗方面，尚未建立完全有效的技术方法。因此，软骨组织工程开发新的种子细胞来源有着重要的科学意义。干细胞技术是当今再生医学研究领域最为前沿的科学，本课题以诱导多能性干细胞为种子来源，通过拟胚体途径，在体外诱导软骨形成。我们将体外诱导分化的组织块进行软骨的表征实验，通过QPCR、免疫蛋白印迹、体外免疫染色等实验方法证实我们诱导的组织块具备软骨的表征。最终结果表明该途径可以成功诱导出具有软骨特征的组织样品，从而初步解决了软骨研究的种子细胞问题，也进一步为软骨发生发育的研究以及软骨疾病的修复提供了一定的基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2015-04-01）
曲华正[4]（2010）在《体外共培养方法诱导兔脂肪干细胞向软骨细胞方向分化的实验研究》一文中研究指出目的由于软骨的组织学特点及其无神经和血管的营养,在正常的生理环境中,关节软骨缺损的修复是很困难的。应用生物相容性聚合物与细胞复合构建组织功能性软骨以及刺激诱导软骨形成都是修复软骨缺损的方法。在软骨再生中,自体软骨细胞是很有用的,但是其作用却受制于终末分化的软骨细胞增殖能力和纤维性软骨形成等因素。因此,在软骨组织工程中,在干细胞的应用方面,开展了许多研究。近来,脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)因其具有自我更新能力、长时间的细胞生存能力以及多向分化潜能而成为关节透明软骨修复和再生的种子细胞。另外,ADSCs还具有能够在局麻下从身体不同部位大量获取的优势。本实验研究的目的是通过一种创新的脂肪干细胞、软骨细胞和滑膜细胞共培养方法,诱导兔脂肪干细胞向软骨细胞方向分化,通过各项指标的检测,在实践中检验该共培养方法的可行性,并对实验结果进行评价。材料和方法1.取3-4月龄健康新西兰大白兔,3%戊巴比妥耳缘静脉麻醉,无菌取出肾周脂肪组织,I型胶原酶酶解法分离出脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs),进行体外原代培养,传代后差速贴壁培养纯化。流式细胞仪鉴定细胞表面标志CD49d,CD105,CD34,CD106的表达。2.无菌切取3-4月龄新西兰大白兔膝关节非负重区关节软骨及关节内滑膜,将软骨剪成1—3mm3薄片,先以0.25%胰蛋白酶消化30-35分钟,再以0.1%的Ⅱ型胶原酶消化6-8小时,过滤、离心收集、计数,以2×105个／ml的细胞密度接种于培养瓶内；将滑膜剪碎,4mg／m1Ⅰ型胶原酶消化、过滤、离心收集、计数后,以1×105个／ml的细胞密度接种于细胞培养瓶中。将两种细胞分别体外常规培养与扩增,第叁代细胞用于实验。3.取第叁代的ADSCs,根据诱导方式不同分为叁组：Ⅰ组空白对照组,不加任何诱导；Ⅱ组软骨细胞诱导组滴加软骨细胞诱导液(组成：TGF-β1 10n g／ml、bFGF-25ng／ml、Vc 50μg/ml、Dexamethasone10-7M／L)；Ⅲ组共培养组取35mm×10mm培养皿培养的第叁代脂肪干细胞、软骨细胞和滑膜细胞,将叁个皿放入一个200mm×20mm培养皿中,成“品”字形摆放,在大皿中加入培养基(加10%胎牛血清)培养。收集叁组中的脂肪干细胞,提取mRNA,反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)产物电泳及荧光定量PCR检测SOX-9、Aggrecan、TypeⅡcollagen的表达。结果1.细胞形态学改变倒置相差显微镜观察发现,原代细胞接种后24小时可见少量细胞贴壁,呈短梭形。48小时后多数细胞已贴壁并开始伸展,分裂,出现由单个细胞分裂形成的集落。换液2-3次之后,大多数漂浮细胞被清除。5-7天后,细胞逐渐分裂、增殖,形成多个细胞克隆。传代细胞贴壁快,7-8天形成单层,细胞核大,胞浆内颗粒多,呈平行或漩涡状生长。2.ADSCs免疫表型流式测定流式细胞学分析显示,CD49d和CD105均呈阳性表达,CD34和CD106均呈阴性表达。3.RT-PCR电泳及荧光定量PCR检测：在分组培养后的第7天和第14天,叁个目的基因中只有SOX-9、Aggrecan表达,第21天,叁个目的基因都有表达。共培养组SOX-9和TypeⅡcollagen的表达水平均高于诱导组,且有统计学差异；两组在Aggrecan的表达水平上无统计学差异。结论1.ADSCs适合成为软骨组织工程的种子细胞。取材方便,Ⅰ型胶原酶酶解法分离可以获取大量脂肪干细胞,体外培养性能稳定,易于传代扩增,在体外增殖多代之后仍具有完好的细胞特异性标志,并继续保持分化的能力。2.软骨细胞和滑膜细胞可分泌多种生长因子如：转化生长因子TGF-β、胰岛素样生长因子IGF等。这些因子是公认的间充质干细胞(MSCs)软骨分化诱导因子,这些可溶性因子可能在ADSCs软骨形成过程中发挥了重要作用。3.本实验所采用的脂肪干细胞、软骨细胞和滑膜细胞共培养方法,可以使软骨细胞和滑膜细胞分泌的多种生长因子对ADSCs进行诱导,使其向软骨细胞方向分化,并具有软骨细胞表型,诱导效果优于外源性转化生长因子TGF-β的诱导。(本文来源于《山东大学》期刊2010-05-01）
孙凯[5]（2010）在《TGF-β_3诱导大鼠前软骨干细胞向软骨细胞特性方向分化及其在KLD-12自组装肽纳米凝胶中的培养》一文中研究指出目的利用前软骨干细胞(PSCs)作为软骨缺损修复的种子细胞并在KLD-12自组装肽纳米纤维凝胶中培养,以探讨软骨组织工程方法中修复软骨缺损理想的种子细胞和支架材料。方法免疫磁珠分离纯化新生大鼠PSCs,分别采用KLD-12自组装肽纳米纤维凝胶叁维培养(实验组)和普通培养瓶平面培养(对照组),用转化生长因子β_3(TGF-β_3)诱导两组PSCs向软骨细胞特性方向分化。利用RT-PCR、免疫组化等方法测定其向软骨细胞特性方向分化过程中特异性细胞外基质II型胶原(Collagen II)和聚集蛋白聚糖(Aggrecan)表达的情况。结果逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化结果表明KLD-12自组装肽纳米纤维凝胶组细胞在诱导7、14d后均有Collagen II和Aggrecan表达,且RT-PCR结果表明KLD-12自组装肽凝胶组细胞的Collagen II和Aggrecan mRNA表达水平较培养瓶组高,其差异有统计学意义(均p<0.05)。结论TGF-β_3诱导后的PSCs可向成软骨方向分化,诱导后的PSCs与KLD-12自组装肽凝胶复合有望构建组织工程化软骨,KLD-12自组装肽纳米纤维凝胶是较好的软骨组织工程细胞支架。(本文来源于《华中科技大学》期刊2010-04-01）
孙凯,游洪波,陈安民,郭风劲,祁军[6]（2010）在《TGF-β_3诱导大鼠前软骨干细胞向软骨细胞特性方向分化及其在KLD-12自组装肽纳米凝胶中的培养》一文中研究指出目的探讨软骨组织工程方法中修复软骨缺损理想的种子细胞和支架材料。方法免疫磁珠分离纯化新生大鼠前软骨干细胞(PSCs),分别采用KLD-12自组装肽纳米凝胶叁维培养(实验组)和普通培养瓶平面培养(对照组),用转化生长因子β3(TGFβ-3)诱导两组PSCs向软骨细胞特性方向分化。利用RT-PCR、免疫组化等方法测定其向软骨细胞特性方向分化过程中特异性细胞外基质Ⅱ型胶原(collagenⅡ)和聚集蛋白聚糖(aggrecan)表达的情况。结果RT-PCR和免疫组化检测结果表明KLD-12自组装肽纳米凝胶组细胞在诱导7、14 d后均有collagenⅡ和aggrecan表达,且RT-PCR检测结果表明KLD-12自组装肽凝胶组细胞的collagenⅡ和aggrecan mRNA表达水平较对照组高,其差异有统计学意义(均P<0.05)。结论TGFβ-3诱导后的PSCs可向成软骨方向分化,诱导后的PSCs与KLD-12自组装肽凝胶复合有望构建组织工程化软骨,KLD-12自组装肽纳米凝胶是较好的软骨组织工程细胞支架。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2010年01期）
王飞雄,郭风劲,张树威,许凯[7]（2009）在《生长分化因子5诱导大鼠软骨前体细胞向成软骨方向分化》一文中研究指出背景:生长分化因子5和软骨前体细胞都在肢体纵向发育中发挥重要作用。目前尚无生长分化因子5对软骨前体细胞影响的文献报道。目的:实验创新性构思重组生长分化因子5干预软骨前体细胞,希望得到生长分化因子5诱导软骨前体细胞向软骨细胞分化的证据。设计、时间及地点:细胞形态学体外实验,于2007-11/2008-03在华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科研究室完成。材料:纯系清洁级新生24h内的SD大鼠12只,用于制备软骨前体细胞。生长分化因子5为PeproTech公司产品。方法:免疫磁珠分离纯化软骨前体细胞。取第3代细胞,分别用含0,10,50和100μg/L的完全软骨形成培养基干预,诱导14d。对照组采用低糖DMEM培养基。主要观察指标:光镜观察细胞形态和生长增殖,四甲基偶氮唑盐检测细胞增殖活性,阿利新蓝染色蛋白聚糖,应用免疫组织化学和反转录-聚合酶链反应检测Ⅱ型胶原的表达。结果:分离纯化的软骨前体细胞贴壁牢固,生长旺盛,折光度好,光镜下呈多角形或梭形。软骨前体细胞的增殖在48h内呈剂量依赖性增高,100μg/L生长分化因子5组细胞的增殖率显着高于其他组(P<0.05)。诱导14d后阿利新蓝染色阳性,细胞外基质中有明显的蛋白聚糖形成。在生长分化因子5干预软骨前体细胞第7天,Ⅱ型胶原mRNA和Ⅱ型胶原蛋白出现表达,并且14d持续表达。结论:生长分化因子5能够促进软骨前体细胞的增殖分化。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2009年41期）
孙凯,游洪波,陈安民,郭风劲,丁然[8]（2009）在《TGF-β3诱导大鼠前软骨干细胞向成软骨方向分化及其在KLD-12自组装肽纳米凝胶中的培养》一文中研究指出目的:利用前软骨干细胞(PSCs)作为软骨缺损修复的种子细胞并在KLD12自组装肽纳米纤维凝胶中的培养,以探讨软骨组织工程方法修复软骨缺损理想的种子细胞和支架材料。(本文来源于《中华医学会疼痛学分会第八届年会暨CASP成立二十周年论文集》期刊2009-09-01）
王飞雄,郭风劲,张树威,许凯[9]（2009）在《GDF5诱导大鼠软骨前体细胞向成软骨方向分化》一文中研究指出目的:探讨生长分化因子5诱导软骨前体细胞向软骨细胞分化的机制。设计、时间及地点:细胞形态学体外实验,于2007年11月至2008年3月在华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科研究室完(本文来源于《中华医学会疼痛学分会第八届年会暨CASP成立二十周年论文集》期刊2009-09-01）
游洪波,陈安民[10]（2004）在《增强型绿色荧光蛋白基因转染及TGFβ_3诱导前软骨干细胞向成软骨方向分化》一文中研究指出目的 探讨增强型绿色荧光蛋白基因 (EGFP)转染前软骨干细胞 (PSCs)的效果及TGFβ3 诱导PSCs向成软骨方向定向分化的可行性。方法 利用磁性细胞分选系统分离纯化有成纤维细胞生长因子受体 3(FGFR 3)表面标志的PSCs。采用脂质体介导法将EGFP基因转染PSCs,G4 18筛选得到EGFP基因修饰PSCs。用免疫组化及免疫荧光检测EGFP基因修饰PSCs的FGFR 3表达。采用藻酸盐凝胶培养 ,以TGFβ3 诱导分离纯化的PSCs向成软骨方向定向分化。应用免疫组化、RT PCR检测PSCs向成软骨方向分化过程中特异性软骨基质成分的表达情况。结果 EGFP基因转染PSCs后 ,2 4hGFP开始表达 ,4 8～ 72hGFP表达最强。G4 18筛选后 ,EGFP基因修饰PSCs体外培养 6周仍有较强GFP表达。在含TGFβ3 的藻酸盐凝胶培养 7、14、2 1d均有II型胶原表达 ;诱导2 1d的PSCs免疫组化检测可见细胞及周围均有X型胶原、Aggrecan、COMP表达 ;RT PCR检测显示在培养早期 ( 8d内 )开始出现Aggrecan、X型胶原、COMP等的表达 ,中期 ( 8d后 )开始出现II型胶原表达。结论 EGFP基因修饰PSCs在体外能长期稳定表达GFP ,为应用组织工程技术修复骨骺损伤提供方便追踪观察的种子细胞。TGFβ3 能诱导PSCs向成软骨方向定向分化。(本文来源于《中华小儿外科杂志》期刊2004年06期）
软骨方向诱导论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)是指通过一定的方法,将某些特定的转录因子转入到已分化的成体细胞,使其重编程为形态和功能上类似于胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESCs)的一类细胞。由于其避开了既往胚胎干细胞研究在细胞来源和伦理道德方面等问题,从一诞生起就迅速引发了科学界的强烈兴趣,并在再生医学、疾病建模及新型药物筛选方面展现出极大的优势。软骨由于其组织结构的特异性,缺乏神经血管分布,出现局部破坏和缺损后难以自行修复,常造成不同程度的关节功能障碍乃至整个关节功能的丧失。i PS技术的发展给软骨缺损的修复提供新的途径。本文就近年来有关i PS细胞技术及其在软骨组织工程方面的新研究进展及应用作一综述。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
软骨方向诱导论文参考文献
[1].吴磊,刘洋,谭俊峰,孙凯,郑先念.生长分化因子5诱导脂肪干细胞向成软骨细胞方向分化的实验研究[J].生物医学工程与临床.2017
[2].郑育亮,张志光.诱导多能干细胞成软骨方向分化的研究进展[J].中华老年口腔医学杂志.2015
[3].李波.釉结在牙齿发育中作用的探究及iPS细胞向软骨方向诱导分化的体外研究[D].吉林大学.2015
[4].曲华正.体外共培养方法诱导兔脂肪干细胞向软骨细胞方向分化的实验研究[D].山东大学.2010
[5].孙凯.TGF-β_3诱导大鼠前软骨干细胞向软骨细胞特性方向分化及其在KLD-12自组装肽纳米凝胶中的培养[D].华中科技大学.2010
[6].孙凯,游洪波,陈安民,郭风劲,祁军.TGF-β_3诱导大鼠前软骨干细胞向软骨细胞特性方向分化及其在KLD-12自组装肽纳米凝胶中的培养[J].华中科技大学学报(医学版).2010
[7].王飞雄,郭风劲,张树威,许凯.生长分化因子5诱导大鼠软骨前体细胞向成软骨方向分化[J].中国组织工程研究与临床康复.2009
[8].孙凯,游洪波,陈安民,郭风劲,丁然.TGF-β3诱导大鼠前软骨干细胞向成软骨方向分化及其在KLD-12自组装肽纳米凝胶中的培养[C].中华医学会疼痛学分会第八届年会暨CASP成立二十周年论文集.2009
[9].王飞雄,郭风劲,张树威,许凯.GDF5诱导大鼠软骨前体细胞向成软骨方向分化[C].中华医学会疼痛学分会第八届年会暨CASP成立二十周年论文集.2009
[10].游洪波,陈安民.增强型绿色荧光蛋白基因转染及TGFβ_3诱导前软骨干细胞向成软骨方向分化[J].中华小儿外科杂志.2004