乙酸钠对内毒素休克的保护作用及抗炎机制的研究

论文摘要

败血症是临床上常见的危重病症,死亡率高达50 %以上。本论文从体内和体外两方面实验,研究了乙酸钠（NaA）对LPS所致内毒素休克的保护作用及其抗炎机制,为深入了解短链脂肪酸中最主要成分乙酸对人体有益作用提供了理论依据,为开发乙酸饮品及乙酸盐保健食品提供了实验数据。体内实验采用不同剂量的NaAc对受试动物预处理30 min,然后腹腔注射D-氨基半乳糖/脂多糖（D-GalN/LPS）诱导小鼠急性肝衰竭,观察各组实验动物死亡率,肝脏组织结构的变化,测定血清ALT活性、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及一氧化氮（NO）的含量。体外实验采用不同剂量的NaAc对小鼠巨噬细胞（RAW264.7）预处理30 min,然后加入LPS诱导炎症因子的产生,通过四甲基偶氮唑蓝微量酶比色法（MTT法）观察不同浓度的NaAc对RAW264.7生长活性的影响,测定细胞培养上清液中NO的含量,用酶联免疫吸附法（ELISA）检查iNOS的含量,采用免疫细胞化学染色及Western Blotting方法观察NaAc对LPS活化RAW264.7细胞NF-κB的影响。本实验研究结果表明NaAc对实验性急性肝衰竭具有保护作用,显著降低了肝细胞的损伤（ALT显著降低）,以及实验动物小鼠的死亡率,且上述保护作用是由抑制促炎因子如TNF-α和NO的产生介导的,其机制之一是NaAc抑制了核转录因子NF-κB的活性,即通过抑制细胞质内NF-κB复合体中p65蛋白核转位,从而调节细胞因子、iNOS等基因的表达,降低TNF-α和NO的合成。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 内毒素引起机体免疫应答的作用机制
• 1.1.1 内毒素概述
• 1.1.2 LPS 结合蛋白（ LBP ）和CD14
• 1.1.3 MD-2
• 1.1.4 T LR 4 信号转导通路
• 1.2 内毒素介导的炎症因子的产生及作用机制
• 1.2.1 炎症反应
• 1.2.2 一氧化氮的生理功能和病理意义
• 1.2.3 iNOS 的调节机制
• 1.2.4 NF-κB 的活化
• 1.3 短链脂肪酸的生理作用研究
• 1.3.1 短链脂肪酸
• 1.3.2 短链脂肪酸的生理作用
• 第2章 乙酸钠对D-GalN
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验动物
• 2.2.2 主要试剂和仪器
• 2.2.3 处理
• 2.2.4 样本的收集及制备
• 2.2.5 肝损伤的评价
• 2.2.6 血清中TNF-α的测定
• 2.2.7 NO 含量测定
• 2.2.8 统计学处理
• 2.3 结果
• 2.3.1 NaAc 降低D-GalN
• 2.3.2 NaAc 对D-GalN
• 2.3.3 血清、肝及脑组织中的TNF-α水平
• 2.3.4 血清、肝及脑组织中的NO 水平
• 2.4 讨论
• 第3章 乙酸钠抑制LPS 诱导小鼠巨噬细胞产生NO 的机制
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 实验细胞
• 3.2.2 主要试剂和仪器
• 3.2.3 主要试剂的配制
• 3.2.4 灭菌、去热原处理及细胞培养
• 3.2.5 细胞模型的建立和干预
• 3.2.6 实验分组
• 3.2.7 NaAc 对RAW264.7 细胞生长活性的影响
• 3.2.8 NaAc 对LPS 诱导RAW264.7 细胞产生NO 的影响
• 3.2.9 NaAc 对LPS 诱导RAW264.7 细胞产生iNOS 的影响
• 3.2.10 NaAc 对LPS 诱导RAW264.7 细胞NF-κB 活化的影响
• 3.2.11 统计学处理
• 3.3 结果
• 3.3.1 NaAc 对RAW264.7 细胞生长活性的影响
• 3.3.2 NaAc 对LPS 诱导RAW264.7 细胞产生NO 的影响
• 3.3.3 NaAc 对LPS 诱导RAW264.7 细胞产生iNOS 的影响
• 3.3.4 NaAc 对LPS 诱导RAW264.7 细胞NF-κB 活化的影响
• 3.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间取得的研究成果
• 致谢