论文摘要
第一部分SOX4在人恶性黑素瘤组织中的表达目的：研究SOX4在人类恶性黑素瘤组织中的表达情况,探讨SOX4与恶性黑素瘤之间可能存在的关系。方法：用免疫组化SP法检测30例恶性黑素瘤组织中的SOX4的表达情况。结果：在恶性黑素瘤组织中,肿瘤细胞的细胞核内可见棕黄色至深褐色颗粒,胞浆也可着色。30例恶性黑素瘤组织中,有17例SOX4表达为阳性,阳性率为56.7%,而正常人皮肤组织中未见阳性表达,两组间SOX4表达阳性率具有显著性差异（P<0.05）。结论：在恶性黑素瘤组织中SOX4出现异常的阳性表达,SOX4可能与恶性黑素瘤的发病机制有关。第二部分采用RNA干扰技术抑制恶性黑素瘤细胞中SOX4的表达并研究其对Wnt/β-catenin信号途径活性的影响目的：研究恶性黑素瘤A375细胞中SOX4对Wnt/β-catenin信号途径中Wnt3A及β-catenin的表达的影响以及对Wnt/β-catenin信号途径活性的影响,探讨恶性黑素瘤A375细胞中SOX4对Wnt/β-catenin信号途径的调控作用及其可能的机制。方法：采用RNA干扰技术,将两段SOX4 siRNA导入恶性黑素瘤A375细胞,使SOX4基因沉默,分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测干扰后Wnt/p-catenin信号途径中Wnt3A及β-catenin的mRNA及蛋白表达情况的变化,并采用TOPflash/FOPflash双质粒报告基因系统检测恶性黑素瘤A375细胞中Wnt/β-catenin信号途径活性随RNA干扰变化的情况。结果：本研究使用的两段SOX4 siRNA均成功转染恶性黑素瘤A375细胞并有效抑制SOX4基因表达（P<0.05）,发挥了对SOX4的基因沉默作用。转染SOX4 siRNA对Wnt3A的mRNA及蛋白表达水平无显著影响（P>0.05）,对β-catenin的mRNA表达水平亦无显著性影响,但使得细胞内β-catenin蛋白量减少（P<0.05）。同时,转染了SOX4 siRNA的A375内Wnt/β-catenin信号途径活性较转染非特异性siRNA的A375细胞及空白对照组为低,差异具有显著性（P<0.05）。结论：在恶性黑素瘤A375细胞中,SOX4对Wnt/β-catenin信号途径具有正向调控作用,这种调控作用与β-catenin有关。SOX4上调A375细胞中β-catenin蛋白含量,其作用发生在转录后水平,可能是SOX4抑制β-catenin降解的结果,也有可能与转录后调控或翻译调控等有关。第三部分SOX4 siRNA对恶性黑素瘤细胞中Survivin的表达及细胞增殖的影响目的：研究SOX4对恶性黑素瘤A375细胞中Wnt/β-catenin信号途径的靶基因Survivin的基因表达的影响及对A375细胞增殖活力的影响方法：分别用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测RNA干扰后A375细胞Survivin的mRNA及蛋白表达水平的变化；用MTT法检测A375细胞的增殖活力。结果：（1）SOX4 siRNA使得A375细胞Survivin的mRNA及蛋白表达水平均显著下降（P<0.05）。（2）转染了SOX4 siRNA的A375细胞增殖活力较对照组明显下降（P<0.05）。结论：SOX4对恶性黑素瘤A375细胞的增殖具有促进作用,其机制可能与SOX4增强Wnt/β-catenin信号途径活性而上调Survivin的基因表达有关。