海带多酚的分离提取及其抗肿瘤活性研究

论文摘要

我国的海带资源十分丰富,海带养殖已成为中国海水养殖的支柱产业之一,产量居世界首位。越来越多的研究表明褐藻多酚具有很广泛的生物活性。为了充分利用海带,开发纯度较高的海带多酚,本论文以中国沿海常见的褐藻门海带为原料,依据药物高通量筛选理论,以抗肿瘤活性为目的,提取分离了海带中活性物质--海带多酚。1、以单因素试验优化海带多酚的提取工艺,80%乙醇常温避光浸提海带粉末,12小时反复两次。氯仿脱色7小时,得到海带多酚粗提物。得率为24.25mg/kg海带。等体积乙酸乙酯进一步萃取,单因素试验优化萃取条件得到:pH值为3.4,萃取30分钟,两次。得率为10.3mg/kg海带。2、比较四种主要的提取方法:浸提法、索氏回流法、微波法、超声波法。结果表明,微波法提取得率最高。比甲醇浸提法、索氏提取法高62.5%,比超声法高150.5%。通过4因素3水平正交试验优化了微波法提取海带多酚的条件,结果表明:PH=7,中火破碎,时间90s,料液比1:10为微波法提取海带多酚的最优条件。在该条件下得率为34.52mg/kg海带。3、用葡聚糖凝胶柱G-25对海带多酚提纯物进一步分离纯化,以蒸馏水为流动相,流速为60mL/h洗脱。可以有效分离多酚提取物,未处理生海带提取物为3个组分,处理的熟海带提取物为2个组分。5、采用MTT法测定海带提取液体外抗肿瘤活性。粗提液对HeLa细胞的IC50为2.32μg·mL-1,使MCF-7和PC12细胞呈现出猝死现象,浓度达到6.91μg·mL-1时可完全抑制三种肿瘤细胞的增殖;乙酸乙酯萃取物对HeLa细胞,MCF-7细胞和PC-12细胞表现为计量依赖型,IC50分别是:0.211μg·mL-1、0.174μg·mL-1、0.158μg·mL-1。当提取物浓度达到0.5μg·mL-1时几乎没有存活细胞。凝胶柱层析得到未处理生海带组分一在浓度为1.45μg·mL-1时抑制率达到72.41%,处理海带组分一在0.30μg/mL时抑制率达到90%以上,组分二浓度大于1.68μg·mL-1时致死率达到90%以上。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 文献综述
• 1.1 褐藻概述
• 1.1.1 褐藻的种类与分布
• 1.1.2 褐藻的主要特征
• 1.1.3 褐藻多糖
• 1.1.4 甘露醇
• 1.1.5 褐藻酸钠
• 1.1.6 褐藻的经济意义
• 1.2 褐藻多酚的研究进展
• 1.2.1 植物多酚
• 1.2.2 褐藻多酚的发现
• 1.2.3 褐藻多酚类化合物的结构研究
• 1.2.4 褐藻多酚的生物活性
• 1.2.5 褐藻多酚的提取分离技术
• 1.2.6 多酚的检测
• 1.2.7 褐藻多酚的毒性
• 1.3 海带的研究现状
• 1.3.1 海带的发展史
• 1.3.2 海带的功能
• 1.3.3 海带生物活性物质的研究
• 1.4 海洋药物的新发展
• 1.5 研究的背景、目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 主要仪器设备
• 2.3 主要试剂
• 3 海带多酚提取工艺研究
• 3.1 试验方法
• 3.1.1 海带多酚的测定
• 3.1.2 单因素优化海带多酚粗提物提取方法
• 3.1.3 比较四种海带多酚提取方法
• 3.1.4 正交试验优化微波提取条件
• 3.1.5 乙酸乙酯萃取海带多酚粗取物的单因素优化试验
• 3.2 结论与分析
• 3.2.1 FD法测定多酚含量的稳定性
• 3.2.2 多酚含量标准工作曲线
• 3.2.3 粗提物提取工艺优化结果
• 3.2.4 四种提取方法对海带多酚提取效果的比较
• 3.2.5 微波法正交试验与统计分析
• 3.2.6 纯海带多酚提取工艺优化结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 4 海带多酚提取物体外抗肿瘤活性研究
• 4.1 试验方法
• 4.1.1 细胞培养及测定
• 4.1.2 海带多酚粗提物的体外抗肿瘤活性
• 4.1.3 乙酸乙酯萃取物体外抗肿瘤活性
• 4.1.4 流式细胞技术
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 海带多酚粗提物的体外抗肿瘤活性
• 4.2.2 乙酸乙酯萃取物的体外抗肿瘤活性
• 4.2.3 流式细胞技术初步分析提取物抗肿瘤机理
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 5 海带多酚层析分离工艺及体外抗肿瘤活性研究
• 5.1 方法
• 5.1.1 葡聚糖G-25层析柱分离纯化海带多酚
• 5.1.2 各组分体外抗肿瘤细胞活性
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 葡聚糖凝胶G-25分离纯化海带多酚
• 5.2.2 海带多酚的体外抗肿瘤活性
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况
• 致谢