海带蓝光受体及相关基因的研究

论文摘要

本研究中运用四种不用的方法提取海带孢子体RNA,通过对比分析,确定了采用CTAB提取液[2% （w/v） CTAB,100 mM Tris-HC1 （pH 8.0）, 50 mM EDTA, pH 7.5, 2 M NaCl, 50 mM DTT]提取RNA的方法,该方法的主要改进之处: （1）高浓度（50 mM）的DTT作为防止多酚氧化的还原剂加入提取液中;（2） 1/4体积的乙醇和1/9体积的3 M醋酸钾（pH 4.8）用来沉淀去除多糖;（3） 1/10倍体积的3 mol/L醋酸钠（pH 5.0）和两倍体积的乙醇选择性沉淀RNA;（4） -80℃沉淀30 min沉淀RNA。CTAB改进法提取的海带孢子体RNA质量好（A260/280 =1.96±0.05）,产量高（68μg/g）,分离的RNA可用于RT-PCR反应,扩增相关基因片段。该方法提取海带配子体RNA效果也很好。根据拟南芥（Arabidopsis thaliana）、莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）、铁线蕨（Adiantum capillus-veneris）、转板藻（Mougeotia scalaris）和无隔藻（Vaucheria frigida）等的蓝光受体蛋白保守序列,设计一系列简并引物,进行RT-PCR扩增,筛选并克隆测序了4条序列片段,通过比对分析,所得序列与已知的蓝光受体基因序列不一致。在所获得的序列中,一条783 bp的序列与肌醇-1-磷酸合成酶基因的片段有较高的相似性,通过RACE法克隆出该基因的3’末端,5’末端克隆没有成功,全长序列有待深入分析。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 海带生物学特征及生活史概述
• 1.2 高等植物光形态建成及光受体
• 1.2.1 光敏色素（phytochrome）
• 1.2.2 隐花色素（cryptochrome）
• 1.2.3 向光色素（phototropin）
• 1.2.4 其他种类的光受体
• 1.2.5 光受体的协同作用
• 1.3 海藻的光形态建成
• 1.3.1 光周期反应
• 1.3.2 光质对藻类发育的影响
• 1.3.3 藻类的光受体
• 1.4 海带生长发育及其光诱导的研究
• 1.5 磷脂酰肌醇信号系统
• 1.6 肌醇-1-磷酸合成酶
• 1.7 本研究的目的及意义
• 第二章 海带孢子体及配子体RNA 提取
• 2.1 引言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 仪器和试剂
• 2.2.3 试剂配制
• 2.2.4 RNA 提取方法
• 2.2.5 RNA 的完整性及质量检测
• 2.2.6 海带配子体RNA 提取
• 2.3 结果和讨论
• 2.4 小结
• 第三章 海带蓝光受体基因的筛选
• 3.1 引言
• 3.2 材料和方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 仪器和试剂
• 3.2.3 试剂配制
• 3.2.4 海带总RNA 的提取
• 3.2.5 RT-PCR
• 3.2.6 胶回收
• 3.2.7 感受态细胞制备
• 3.2.8 DNA 片段与载体的连接
• 3.2.9 转化
• 3.2.10 阳性克隆的检测
• 3.2.11 测序分析
• 3.3 结果和讨论
• 3.3.1 RT-PCR 扩增结果
• 3.3.2 扩增片段回收
• 3.3.3 测序结果及序列比对
• 3.4 小结
• 第四章 肌醇-1-磷酸合成酶基因的筛选
• 4.1 引言
• 4.2 材料和方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 仪器和试剂
• 4.2.3 海带孢子体RNA 提取
• 4.2.4 RACE 法克隆全长基因序列
• 4.2.5 RT-PCR
• 4.2.6 胶回收
• 4.2.7 感受态细胞制备
• 4.2.8 DNA 片段与载体的连接
• 4.2.9 转化
• 4.2.10 阳性克隆的检测
• 4.2.11 测序分析
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 3’-RACE 扩增及测序结果
• 4.3.2 5’-RACE 扩增结果
• 4.3.3 RT-PCR 扩增结果
• 4.4 小结
• 第五章 结论
• 1. 海带孢子体及配子体 RNA 提取方法的筛选与改进
• 2. 海带蓝光受体基因的筛选
• 3. 肌醇-1-磷酸合成酶基因的筛选
• 参考文献
• 发表文章目录
• 致谢