HGF基因修饰的MSC生物学特性及免疫调控作用研究

论文摘要

间充质干细胞（Mesenchymal stem cell，MSC）可通过细胞间作用及分泌细胞因子（HGF、TGF-β等）抑制淋巴细胞增殖，与造血干细胞共移植能够减低GVHD的发生。肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor,HGF）在小鼠异基因骨髓移植模型中具有免疫抑制和修复损伤作用，从多环节减轻GVHD的发生，同时保留GVL效应。为明确MSC和HGF基因两者联合是否具有免疫协同效应，我们开展了HGF基因修饰MSC免疫调控作用的研究。期望为HGF基因修饰骨髓间充质干细胞防治GVHD提供实验基础。 我们利用Percoll密度梯度离心与贴壁培养扩增人骨髓来源的MSC，利用酶消化后骨片培养的方法分离纯化小鼠骨来源的MSC。上述细胞均呈贴壁生长的成纤维细胞样形态，表型特征分析显示细胞为非造血非内皮细胞群，分化试验证明细胞具有体外成骨和成脂肪能力，说明获得的细胞符合MSC的确认“标准”。 在此基础上，我们观察了HGF基因转染对MSC生物学特性的影响。首先，利用携带GFP基因的腺病毒载体（Ad-GFP）感染MSC，以GFP为报告基因，确定了重组腺病毒对MSC的感染效率。流式检测结果表明，腺病毒感染强度MOI为150时，感染效率几乎达到了100％；我们利用相同MOI的Ad-HGF感染MSC，用ELISA法检测HGF的分泌表达，结果表明感染后HGF可在短期内高效表达。提示腺病毒可以有效介导HGF在MSC中表达。 为确定HGF基因转染对MSC生物学特性的影响，我们检测了转HGF基因MSC（MSC-HGF）的细胞表型，结果表明转HGF基因不影响MSC表型，与未转染基因细胞相似，MSC-HGF仍表达CD29、CD73、CD105、CD166和HLA-ABC，不表达CD31、CD34、CD45以及HLA-DR。我们进一步检测了MSC-HGF的分化性能，诱导脂肪分化后油红O染色显示MSC-HGF体外成脂肪能力正常；诱导成骨分化后进行ALP活性染色和定量以及Ca沉积定量均表明MSC-HGF仍具有体外成骨能力；用地塞米松诱导后，在mRNA水平检测到成骨、脂肪和软骨分化相关基因的表达；另外，不诱导时MSC-HGF与MSC成骨、成软骨和成脂肪标志分子表达无差异，说明HGF基因修饰本身不引起间充质干细胞分化，并且不影响MSC

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分：人和小鼠间充质干细胞分离、培养及鉴定
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 第二部分：HGF基因修饰对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 第三部分：MSC-HGF体内外免疫调节作用研究
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 附博士期间发表的文章