论文题目: 家蚕浓核病毒BmDNV-6的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 特种经济动物饲养
作者: 潘敏慧
导师: 鲁成
关键词: 家蚕,浓核病毒,分类,流行特征,病原性,组织病变,基因组,进化
文献来源: 西南农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 浓核病毒(Densoviruses,DNVs)属于细小病毒科(family Parvoviridae),浓核病毒亚科(subfamily Densovirinae),下设3个属,即浓核病毒属(densovirus)、相同病毒属(Iteravirus)和短病毒属(Brevidensovirus)。它们能感染寄生鳞翅目(lepidoptera)、双翅目(diptera)、直翅目(orthoptera)和蜻蜓目(Odonate)等昆虫。家蚕浓核病毒(BmDNV)属相同病毒属。近三十年来,BmDNV已分离到十余株,由于家蚕浓核病毒核酸组成复杂,Bergoin等提出将家蚕浓核病毒分成5类,即BmDNV-1(伊那株)、BmDNV-2(山梨株)、BmDNV-3(中国株)、BmDNV-4(印度株)和BmDNV-5(信大株)。1999年从西南农业大学家蚕基因库的病蚕中分离到一种浓核病毒,经研究发现是一种新型家蚕浓核病毒,命名为BmDNV-6。本文对该病毒的分类、流行病学和分子生物学等进行了研究,取得了以下研究结果: 一、BmDNV-6的分离、鉴定 1.BmDNV-6的核酸特性 核酸大小 BmDNV-6经分离纯化,制备的病毒核酸琼脂糖电泳结果表明,BmDNV-6的核酸大小约为6.5kb,与BmDNV-1(5kb)和BmDNV-2(双组分DNA,6.6kb和6.1kb)的核酸大小不同,三种家蚕浓核病毒的核酸存在明显差异,是三种不同的家蚕浓核病毒(图1)。 核酸类型 BmDNV-6病毒核酸分别用DNase和RNase消化,电泳检测显示BmDNV-6的核酸能被DNase酶消化,但不能被RNase酶消化,表明BmDNV-6的核酸类型为DNA,即BmDNV-6为DNA病毒。 核酸的单、双链 低盐溶液制备的BmDNV-6核酸与1.8%甲醛液分别作用0h、24h后,其在260nm处的吸光度明显增加,表明BmDNV-6为单链DNA病毒。 2.BmDNV-6与BmDNV-1和BmDNV-2的血清学关系 BmDNV-1、BmDNV-2和BmDNV-6分别与BmDNV-1、BmDNV-2和IFV的抗体进行免疫斑点杂交,杂交结果显示出BmDNV-1、BmDNV-2分别与其对应的抗体产生杂交信号,而BmDNV-6与BmDNV-1、BmDNV-2和BmFV的抗体没有杂交信号,即BmDNV-6与BmDNV-1、BmDNV-2和BmFV没有血清学关系。 由于该病毒为单链DNA病毒,基因组大小约为6500nt,病毒在病蚕感染组织的细胞核中增殖,引起细胞核的膨大。根据病毒分类规则,它应属于浓核病毒。但它与已发现和分离的BmDNV-Ⅰ型和BmDNV-Ⅱ型没有血清学关系,并且与已发现的DNV病毒核酸大小不同。因
论文目录:
摘要
ABSTRACT
第1章 文献综述
1.1 细小病毒
1.1.1 细小病毒科的分类现状
1.1.2 细小病毒科的分类特征
1.1.3 细小病毒科的研究进展
1.1.4 细小病毒的进化
1.2 浓核病毒
1.2.1 浓核病毒的分类及其特征
1.2.2 浓核病毒应用
1.3 家蚕浓核病毒
1.3.1 家蚕浓核病毒的发现
1.3.2 家蚕浓核病毒的特征
1.3.3 家蚕浓核病的病理学研究
1.3.4 家蚕浓核病的流行病学特征
1.3.5 浓核病毒检测方法
1.3.6 家蚕浓核病毒的分子生物学研究进展
第2章 前言
2.1 研究的目的和意义
2.2 研究内容和方法
2.2.1 主要研究内容
2.2.2 技术路线
第3章 BmDNV-6的分类研究
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 BmDNV-6核酸的制备方法
3.2.2 BmDNV-6核酸特性
3.2.3 BmDNV-6病毒的血清学检测
3.2.4 病变组织的HE染色观察
3.3 讨论
3.3.1 BmDNV-6核酸制备方法
3.3.2 BmDNV-6的分类
第4章 BmDNV-6的病理学研究
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与分析
4.2.1 BmDNV-6病毒感染蚕的病症
4.2.2 病变组织的HE染色观察
4.2.3 病毒感染细胞的超微结构变化
4.2.4 BmDNV-6感染组织的荧光原位杂交观察
4.3 讨论
4.3.1 BmDNV-6的侵染增殖过程与BmDNV的异同
4.3.2 BmDNV-6与BmDNV感染组织的差异
第5章 BmDNV-6基因组片段的克隆与分析
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.2 结果与分析
5.2.1 BmDNV-6全基因组的PCR扩增
5.2.2 BmDNV-6全基因组的克隆
5.2.3 BmDNV-6全基因组的亚克隆
5.2.4 BmDNV-6基因组片段的序列分析
5.2.5 BmDNV-6的进化
5.3 讨论
第6章 BmDNV-6的流行病学研究
6.1 材料与方法
6.1.1 材料
6.2.2 方法
6.2 结果与分析
6.2.1 BmDNV-6的流行情况
6.2.2 BmDNV-6对各种理化因子的稳定性
6.2.3 BmDNV-6的病原性
6.3 讨论
6.3.1 BmDNV-6与家蚕浓核病毒的病原性差异
6.3.2 BmDNV-6的流行病学特征
6.3.3 BmDNV-6引起的浓核病的防治对策
第7章 结论
参考文献
致谢
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发布时间: 2005-07-19
参考文献
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