森林革蜱种群生态及希伯来花蜱卵蜡层抑菌分子研究

论文摘要

本研究利用野外可控及模拟实验调查了河北省自然条件下森林革蜱Dermacentor silvarum生活史各发育阶段的生物学特性。在蜱类分布的自然生境中建立可控样方,自然光照和气候条件下,森林革蜱D. silvarum幼蜱、若蜱和成蜱在兔体吸血,非寄生阶段在可控样方内自由生活,记录其各发育阶段生活史参数并观察找寻宿主行为及季节发生情况。结果表明雌蜱具有行为滞育,且其产卵时间及卵的孵化都具有一致性,从而使自然条件森林革蜱D. silvarum主要活跃在2月下旬至9月上旬。森林革蜱D. silvarum雌蜱可在3月、4月和5月饱血,不同月份饱血的雌蜱其产卵前期和卵的孵化期差异极大,进而使其生活史周期也存在较大差异。自然条件下幼蜱(18天)和若蜱(29天)的发育历期与实验室条件下无明显差异。雌蜱饱血体重与产卵量相关(r = 0.76, p < 0.001),其在3月、4月和5月的生殖效率指数分别为5.7、7.1和6.2。自然条件下,森林革蜱D. silvarum雌蜱产卵方式与实验室条件下有很大不同。在此基础上,进一步调查了自然条件下寄生期及非寄生期森林革蜱D. silvarum的季节发生数量及动态。结果表明,森林革蜱D. silvarum主要在灌丛滋生,一年仅能完成一个世代,其生活史各阶段季节发生具有连续性,仅幼蜱和若蜱的活动存在部分交叉。成蜱主要活跃在2月下旬到5月下旬,高峰出现在4月中旬;幼蜱在6月上旬至9月上旬活动,高峰出现在7月中旬;若蜱主要分布在6月下旬至9月下旬,高峰在8月中旬。森林革蜱D. silvarum成蜱和若蜱主要侵袭羊体耳部,幼蜱不能在羊体寄生。10月后,在羊体发现部分越冬雄蜱寄生,但拖旗法未能捕获自由生活成蜱。测定了希伯来花蜱Amblyomma hebraeum卵及卵蜡层提取物的抑菌活性及抑菌谱,结果表明,希伯来花蜱A. hebraeum卵能够抑制革兰氏阴性菌生长,卵蜡层有机相和水相提取物抑制革兰氏阳性菌的生长。有机相提取物中主要为胆固醇酯以及碳链长度为13到26的脂肪酸。脂类分馏和气相色谱/质谱结果进一步表明,有机相提取物中,不饱和脂肪酸C16:1和C18:2存在抑菌活性。水相提取物与有机相提取物的组成存在差别,且水相提取物具有极强的热稳定性、pH稳定性及蛋白酶稳定性。核磁共振分析测定了36种代谢物,结果表明,其均不具有抑菌活性,因此,水相提取物中发挥抑菌活性的物质还需进一步分离纯化。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 蜱类生态学研究进展
• 1.1 蜱的地理分布与栖息地
• 1.2 蜱类的生活史
• 1.3 蜱类与宿主的关系
• 1.4 蜱类的种群动态
• 1.5 蜱类的越冬生物学
• 1.6 结语
• 2 蜱的滞育研究进展
• 2.1 蜱类滞育的表现形式
• 2.2 蜱类滞育的调节因子
• 2.3 蜱类滞育的生理基础
• 3 蜱类功能物质研究进展
• 3.1 蜱类免疫调节分子
• 3.2 蜱类抗凝血因子
• 3.3 蜱类抗微生物因子
• 3.4 蜱类卵抑菌物质研究
• 第一章 森林革蜱野外生物学特性
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 研究地点
• 1.1.2 森林革蜱成蜱生物学行为观察
• 1.1.3 森林革蜱幼蜱和若蜱生物学特性观察
• 1.1.4 可控自然环境下自由生活森林革蜱宿主找寻及季节发生行为观察
• 1.1.5 统计分析
• 1.2 结果
• 1.2.1 自然条件下森林革蜱生活史
• 1.2.2 森林革蜱产卵特性
• 1.2.3 可控自然环境森林革蜱宿主找寻行为及吸血生物学特性观察
• 1.2.4 可控自然环境森林革蜱幼蜱和若蜱季节发生动态观察
• 1.3 讨论
• 第二章 森林革蜱野外季节发生数量及动态
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 研究地点
• 2.1.2 羊体寄生蜱调查
• 2.1.3 啮齿动物体寄生蜱调查
• 2.1.4 自然环境下自由生活森林革蜱调查
• 2.1.5 数据统计
• 2.2 结果
• 2.2.1 羊体寄生蜱季节发生数量及动态
• 2.2.2 寄生位点及性比
• 2.2.3 森林革蜱幼蜱和若蜱在啮齿动物寄生的数量及动态
• 2.2.4 自然条件下自由生活期森林革蜱季节发生动态
• 2.3 讨论
• 第三章 希伯来花蜱卵蜡层脂类组成及与抗菌活性关系
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 希伯来花蜱蜱的饲养与卵的收集
• 3.1.2 希伯来花蜱卵蜡层提取
• 3.1.3 卵及卵蜡层有机提取物固体培养基抗菌活性分析
• 3.1.4 卵蜡层有机提取物脂类组成的高效液相色谱分析
• 3.1.5 卵蜡层有机相提取物气相色谱和气相色谱/质谱分析脂肪酸组成
• 3.1.6 卵蜡层有机相提取物中脂类分级抽提及抗菌活性分析
• 3.1.7 脂肪酸标准品及根据活性洗脱峰模拟的脂肪酸混合物的抗菌活性分析
• 3.2 结果
• 3.2.1 希伯来花蜱卵及卵蜡层提取物的抗菌活性分析
• 3.2.2 卵蜡层有机提取物脂类组成
• 3.2.3 卵蜡层有机相提取物脂肪酸组成分析
• 3.2.4 希伯来花蜱卵蜡层有机提取物脂类分级抽提及抑菌活性分析
• 3.2.5 脂肪酸标准品及模拟脂肪酸混合物的抗菌活性分析
• 3.3 讨论
• 第四章 希伯来花蜱卵蜡层水相提取物抑菌活性分析
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 希伯来花蜱卵蜡层水相物质提取
• 4.1.2 卵蜡层水相提取物热稳定性和pH 稳定性分析
• 4.1.3 卵蜡层水相提取物的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度
• 4.1.4 卵蜡层水相提取物的溶血活性分析
• 4.1.5 卵蜡层水相提取物蛋白含量测定
• 4.1.6 卵蜡层水相提取物的N-三羟甲基甘氨酸-十二烷基磺酸钠聚丙烯凝胶电泳非变性胶电泳分析
• 4.1.7 卵蜡层水相提取物蛋白酶稳定性分析
• 4.1.8 卵蜡层水相提取物电泳凝胶抗菌蛋白分析
• 4.1.9 卵蜡层水相提取物核磁共振分析
• 4.2 结果
• 4.2.1 卵蜡层水相提取物的抑菌活性及热稳定性和pH 稳定性
• 4.2.2 卵蜡层水相提取物的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度及溶血活性
• 4.2.3 卵蜡层水相提取物蛋白含量测定
• 4.2.4 希伯来花蜱卵蜡层水相提取物的SDS-PAGE 和PAGE 分析
• 4.2.5 希伯来花蜱卵蜡层水相提取物蛋白酶稳定性分析
• 4.2.6 希伯来花蜱卵蜡层水相提取物电泳凝胶抗菌蛋白分析
• 4.2.7 希伯来花蜱卵蜡层水相提取物核磁共振分析
• 4.3 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间取得的科研成果清单