论文摘要
第一部分浅蓝菌素对人胰腺癌细胞株BXPC-3的影响及机制目的：研究脂肪酸合酶（fatty acid synthane，FAS）抑制剂浅蓝菌素（Cerulenin，Cer）对胰腺癌BXPC-3细胞体外生长和凋亡的影响，并初步探讨可能的作用机制。方法：采用不同浓度（0、2.5、5、10、20、40μg/ml）Cer处理胰腺癌细胞BXPC-3，细胞增殖与毒性检测法（CCK8）检测OD值，计算对照组和各实验组BXPC-3细胞的抑制率，并计算最适宜的Cer IC50；取Cer浓度为0、5、10、20μg/ml处理胰腺癌BXPC-3细胞后进行流式细胞术及AnnexinV/PI早期凋亡检测细胞凋亡率和细胞周期的变化；反转录聚合酶链反应（Reverse Transcription Polymerase ChainReaction，RT-PCR）检测FAS mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、Caspase3mRNA表达水平的变化；免疫印迹法（Western Blot）检测细胞凋亡因子Bcl-2、Bax蛋白表达情况，酶测定法检测Caspase8、Caspase9、Caspase3活性。结果：（1）CCK8法显示Cer可明显抑制BXPC-3细胞的生长，并随着浓度的增加和作用时间的延长而明显增强（P<0.05）。（2）流式细胞术及AnnexinV/PI早期凋亡检测出BXPC-3细胞经Cer作用48小时后，细胞周期S期比例上升，从（5.18±0.25）%上升到（25.15±1.15）%，G2期细胞比例下降（P<0.05）。细胞有明显凋亡，且以早期凋亡为主，在5μg/ml浓度下早期凋亡率为（11.67±0.65）%，10μg/ml浓度下为（29.1±1.31）%，而在20μg/ml浓度下为（48.8±1.23）%，与Cer浓度呈正相关。（3）RT-PCR检测FAS mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、Caspase3mRNA表明BXPC-3细胞经Cer作用48小时后，FASmRNA、 Bcl-2mRNA的表达呈浓度依赖性下降，Bax mRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、Caspase3mRNA呈浓度依赖性上升，各浓度组与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。（4） Western Blot结果显示Cer作用于BXPC-3细胞48h可使细胞中的Bcl-2蛋白表达下降，Bax蛋白表达升高，在Cer0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml浓度下Bcl-2/Bax比值分别为（4.29±0.15）、（1.82±0.02）、（1.01±0.08）、（0.38±0.05），差异具有统计学意义（P<0.05）。（5）酶测定法检测Cer作用于BXPC-3细胞48h可使Caspase8、Caspase9、Caspase3的活性增加，且呈浓度依赖性（P<0.05）。Cer5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml浓度组Caspase3活性分别为对照组的（1.75±0.31）、（3.27±0.01）、（4.96±0.02）倍； Caspase9活性分别为对照组的（1.40±0.4）、（2.12±0.06）、（3.39±0.02）倍；Caspase8活性分别为对照组的（1.26±0.07）、（1.86±0.11）、（2.5±0.02）倍。结论：Cer以时间、浓度依赖方式抑制胰腺癌BXPC-3细胞的生长，其机制可能是直接抑制肿瘤细胞增殖；阻滞细胞周期于S期；主要通过线粒体途径诱导细胞发生早期凋亡。第二部分浅蓝菌素联合吉西他滨对胰腺癌细胞BXPC-3的影响目的:探讨Cer联合吉西他滨（Gemcitabine，GEM）对胰腺癌细胞BXPC-3的协同抑制作用及机制。方法:以浓度为10μg/ml的Cer联合20μmol/L的GEM处理对数生长期的人胰腺癌BXPC-3细胞，应用CCK8法检测OD值，计算对照组和各实验组BXPC-3细胞的抑制率；AnnexinV/PI双染法检测BXPC-3细胞早期凋亡情况；RT-PCR半定量检测Bcl-2mRNA、Bax mRNA表达水平的变化，Western Blot检测细胞凋亡因子蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果: Cer和GEM都能有效地抑制人胰腺癌BXPC-3细胞增殖，二者联合作用后，具有协同效应；Cer组作用BXPC-3细胞48h时细胞早期凋亡为（31.37±1.04）%，GEM组为（38.33±0.75）%，联合组为（69.43±0.83）%，联合组晚期凋亡率也明显增加；细胞凋亡因子Bcl-2表达明显下降，促细胞凋亡因子Bax表达上升，各组与对照组及单药组与联合组相比均有统计学意义（P<0.05）。结论：浅蓝菌素可以显著增强吉西他滨对人胰腺癌BXPC-3细胞的生长抑制作用，其机制可能是通过促进细胞凋亡而发挥作用。
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