5-FU与Ⅲ型PI3K信号通路抑制剂联合应用对人胃癌SGC7901细胞的影响

论文摘要

目的:研究5-FU与Ⅲ型PI3K信号通路抑制剂联合应用对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法:分别用5-FU、特异性阻断Ⅲ型PI3K信号转导通路的重组腺病毒PI3K（III）-RNAi-AD、腺病毒NC-RNAi-GFP-AD、5-FU与Ⅲ型PI3K信号通路的抑制剂PI3K（III）-RNAi-AD联合干预胃癌SGC7901细胞24h、48h、72h后,采用MTT法测定各干预对胃癌SGC7901细胞生长的抑制情况,应用流式细胞技术JC-1法检测各干预对胃癌SGC7901细胞线粒体膜电位的影响,应用MDC荧光染色法观察胃癌SGC7901细胞自噬的发生情况,应用免疫荧光法观察自噬特异性蛋白微管相关蛋白1轻链3 （microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3）在胃癌SGC7901细胞中的表达情况;在透射电镜下观察不同干预组胃癌SGC7901细胞的自噬状态。结果:5-FU与PI3K（III）-RNAi-AD联合干预组的胃癌SGC7901细胞增殖明显受到抑制,联合干预组24h、48h、72h的吸光率分别为0.17±1.64%、0.13±4.64%、0.11±3.56%,显著低于其余干预组,差异具有统计学意义（P<0.05）,联合干预组24h、48h、72h的抑制率分达到45.89%±6.67%、72.57%±9.48%、87.51%±4.65%,显著高于其余干预组,差异具有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示:联合干预组处理胃癌SGC7901细胞24h、48h、72h后,绿色荧光细胞占总细胞的百分比分别为74.4%±3.86%、82.3%±1.84%、92.5%±1.1%,显著高于其余干预组,差异具有统计学意义（P<0.05）,绿色荧光细胞数占细胞总数的比值越大,表明线粒体膜电位越低。MDC染色结果显示:联合干预组随着时间延长（24h、48h、72h）自噬囊泡逐渐减少,其余干预组自噬囊泡数量显著高于联合干预组。荧光显微镜下观察到联合干预组LC3蛋白表达随时间延长（24h、48h、72h）逐渐降低,联合干预组免疫荧光强度显著低于其余干预组。电镜下观察各干预组细胞的超微结构,发现联合干预组细胞内自噬体数量显著少于其余干预组,随着时间延长,联合干预组细胞内自噬体数量显著减少。结论:5-FU与Ⅲ型PI3K信号通路抑制剂联合应用使胃癌SGC7901细胞的增殖明显受抑,线粒体膜电位水平显著下降,自噬水平明显下调。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 研究背景
• 引言
• 材料与方法
• 一、材料
• 二、方法
• 结果
• 一、病毒PI3K（III）-RNAi-AD和NC-RNAi-GFP-AD的滴度及对SGC7901 细胞的最佳感染复数
• 二、各种干预对胃癌 SGC7901 细胞增殖的抑制作用
• 三、各干预组中胃癌 SGC7901 细胞线粒体膜电位变化的情况
• 四、MDC 荧光染色检测各干预组中胃癌 SGC7901 细胞自噬的表达情况
• 五、各干预组中胃癌SGC7901细胞内自噬特异性蛋白LC3分布和表达情况
• 六、透射电镜下观察各干预组中胃癌 SGC7901 细胞的超微结构的变化情况
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 中英文对照缩略词表
• 攻读学位期间公开发表的论文
• 致谢