双特异性抗肿瘤重组腺病毒对肝癌细胞及其模型动物的治疗作用研究

论文摘要

本研究利用分子病毒学和分子生物学方法,基于hTERTp肿瘤特异性启动子、肿瘤特异性凋亡诱导基因Apoptin和Kozak序列,构建了重组腺病毒Ad-KVT。旨在通过体内、外抑瘤实验研究,探讨Ad-KVT的抑瘤作用和方式,并将其抑瘤效果与本课题组以往构建的Ad-VT进行比较,从而明确其作用优势和作用基础。重组腺病毒的构建过程表明,Ad-KVT能够稳定、有效的表达所携带外源基因,且具有良好的遗传稳定性。另外,在Kozak序列的驱动下,Ad-KVT中Apoptin的表达量较Ad-VT高,初步实现了本研究的初衷。在体外抑瘤实验研究过程中,我研究利用MTT染色法对Ad-KVT对HepG-2肿瘤细胞的抑制作用进行分析,结果表明,Ad-KVT能够有效抑制HepG-2细胞的增殖,虽然其与Ad-VT抑瘤效果差别不显著,但其对HepG-2细胞的抑制速度高于Ad-VT。另外,本研究还通过AnnexinⅤ分析、DAPI染色、AO/EB染色、活性氧分析和线粒体膜电位分析等方法证实,Ad-KVT的抑瘤作用主要通过诱导细胞凋亡实现。本研究复制了C57BL/6小鼠荷H22腹水瘤模型,并通过该模型构建了C57BL/6小鼠荷H22实体瘤模型。对模型动物体内实体肿瘤的研究结果显示,Ad-KVT与Ad-VT作用结果一致,均可有效抑制H22实体肿瘤的生长,并在一定程度内提高模型动物平均生存期。本研究为进一步探讨Apoptin基因的抑瘤作用提供了佐证,并提示Ad-KVT具有应用于肿瘤基因治疗研究和应用的潜质。

论文目录

• 内容提要
• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 引言
• 第一篇 文献综述
• 第1章 肝细胞癌的治疗进展
• 1.1 概述
• 1.2 预防和筛查
• 1.3 HCC的诊断
• 1.4 肿瘤的分期
• 1.5 肝脏储备功能评估
• 1.6 HCC的治疗
• 第2章 复制型腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用
• 2.1 概述
• 2.2 腺病毒的特性
• 2.3 腺病毒载体和人类基因治疗
• 2.4 前景和展望
• 第二篇 研究内容
• 第1章 重组腺病毒穿梭载体质粒的构建及鉴定
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 第2章 重组腺病毒Ad-KVT的构建及鉴定
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第3章 Ad-KVT对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用研究
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 第4章 重组腺病毒Ad-KVT的体内抑瘤作用研究
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 作者简介
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢