论文摘要
目的研究胎膜间充质干细胞的分离方法,鉴定其来源于母亲还是胎儿,并研究胎膜来源的间充质干细胞在治疗SD大鼠Ⅲ度烧伤中的作用。方法取足月产胎膜,分别用胰酶消化法、中性蛋白酶+胰酶消化法、中性蛋白酶+Ⅳ型胶原酶消化法处理,收集细胞悬液,加入Amino-MaxⅡ培养基进行常规培养;流式细胞方法分别检测三种方法分离培养的第5代细胞MSC表面标志抗原CD34、CD45、CD73、CD90的表达;抽取男孩胎膜分离的第5代细胞DNA,PCR检测其Y染色体性别决定基因（SRY）表达情况。分别用浓度为3mg/ml、5mg/ml、7mg/ml、9mg/ml的明胶溶液包被脱细胞真皮（acellular dermalmatrix,ADM）,以5×106/ml的密度将细胞种植在包被和未包被的ADM表面,2小时后收集未贴附在ADM上的细胞,计算细胞种植效率。实验组:以7mg/ml的明胶包被ADM,以5×106/ml的密度种植第2～3代细胞,培养3～5天后,移植至SD大鼠Ⅲ度烧伤创面;对照组Ⅰ移植单纯的ADM,对照组Ⅱ未进行移植,术后定期观察创面大体情况,计算创面收缩率、表皮再生面积比例,第5周切取新生皮肤组织行HE染色。结果三种方法均从胎膜中成功分离出贴壁细胞;细胞表达CD73、CD90,不表达CD34、CD45,为间充质干细胞;PCR检测发现男孩胎膜间充质干细胞表达SRY。不同浓度明胶溶液包被和未包被的ADM,其细胞种植效率均无明显区别（P＞0.05）;相比对照组,实验组移植物成活时间更长,创面再上皮化时间较早,创面收缩率较小,再生表皮面积亦较多（P＜0.05）;再生表皮更厚,有明显的表皮突,真皮层毛细血管丰富。结论三种方法均成功地从胎膜中分离出MSC,该细胞含有起源于胎儿的细胞。胎膜来源间充质干细胞复合ADM可促进SD大鼠Ⅲ烧伤创面表皮再生,加速创伤愈合,抑制创面收缩。
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