三聚氰胺单克隆抗体制备及其在ELISA检测中的应用

论文摘要

本实验采用戊二醛法,将三聚氰胺与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）分别进行偶联,制备出人工免疫抗原和检测抗原。采用足垫免疫和常规免疫方法免疫BALB/c小鼠,同时利用检测抗原通过间接ELISA方法进行特异性筛选,足垫免疫的血清效价为1:6400,常规免疫为1:12800。选择被免疫小鼠的腘淋巴结细胞与SP2/0细胞进行融合、筛选和克隆,获得1株能稳定分泌抗三聚氰胺的单克隆抗体的杂交瘤细胞株3H8,同时对单抗的效价、亲和力、亚类等进行了分析。选择3H8杂交瘤细胞的培养上清建立了三聚氰胺的间接竞争ELISA方法,并对其反应条件进行了优化。利用优化后的反应条件进行标准品的间接竞争ELISA检测并建立标准曲线,其标准曲线回归方程为y=-24.531x+37.862,R2=0.9937,最低检测限为0.12ng/mL,线性检测范围为0.12～8ng/mL。分别向牛奶和鸡蛋添加三聚氰胺标准品后进行检测,其平均回收率分别为80.45%、77.5%和76.03%。本研究为三聚氰胺酶联免疫快速检测试剂盒和免疫胶体金检测试纸条的开发研制奠定了基础。

论文目录

• 内容提要
• 英文缩写词表
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第1章 三聚氰胺的研究概况
• 1.1 三聚氰胺的理化性质
• 1.2 三聚氰胺合成工艺
• 1.3 三聚氰胺的用途
• 1.4 凯氏定氮法在蛋白质测定中的不足
• 1.5 三聚氰胺的生理毒性
• 1.6 三聚氰胺类似物的毒性
• 1.7 人体对三聚氰胺耐受标准
• 1.8 三聚氰胺检测方法
• 1.9 原料乳中三聚氰胺快速检测国标的发布
• 1.10 三聚氰胺的诊疗方案
• 1.11 国家质检总局要求加强驻厂监管
• 1.12 中国奶业协会提出的紧急倡议
• 第二篇 研究内容
• 第1章 三聚氰胺完全抗原的制备与鉴定
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 1.5 小结
• 第2章 三聚氰胺单克隆抗体的制备及鉴定
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第3章 三聚氰胺间接竞争ELISA 方法的建立
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 详细摘要
• 英文摘要
• 导师简介