GRP94与人子宫颈癌相关性的研究

论文摘要

研究背景在世界范围内的女性最常见肿瘤中，子宫颈癌排在第二位。每年约有500,000新发病例及多于250,000患者死亡。80%以上的新发病例位于发展中国家，发病率高达80/100,000。大多数为鳞状细胞癌和腺鳞癌，其他类型较少。子宫颈癌主要由人乳头瘤病毒感染引起，其中70%为16型和18型。病毒的持续性感染能够促进宫颈上皮内瘤变的发生。虽然HPV感染是导致子宫颈癌发生的主因，其他辅助因素在子宫颈由病毒感染到癌变的过程中也发挥了重要作用。这些辅助因素包括：长期使用激素类避孕药、多产、吸烟以及同时感染人类免疫缺陷病毒。其他可能的辅助因素：同时感染单纯疱疹病毒2、沙眼衣原体，免疫抑制，部分饮食缺陷，遗传、免疫因素。宫颈细胞学筛查可以诊断出癌前病变，其可成功治愈。目前，免疫治疗和基因治疗作为新兴的生物治疗模式在未来的医学发展中将会占有很大比重。热休克蛋白GRP94（glucose regulated protein）隶属于热休克蛋白90家族，是一种在序列上呈高度保守状态的蛋白质，定位于内质网腔，与内质网蛋白的折叠、转运、分泌及降解相关，能够发现并调节内质网应激、与内质网中的钙离子结合，介导病毒感染细胞以及肿瘤细胞免疫原性的产生。研究发现，GRP94在乳腺癌、肠癌、胃癌等多种肿瘤细胞及肿瘤细胞系中都呈现出过表达的状态，且与肿瘤组织的分化程度及肿瘤进展的阶段相关：分化程度越低，GRP94的表达量越多；肿瘤进展分级越高，GRP94的表达也越高。这种现象的出现可能是由于在实体肿瘤中，血管形成不良，致使肿瘤细胞内形成低葡萄糖、缺氧、酸中毒的特殊微环境，引起大量错误折叠或未折叠蛋白的积聚，诱发非折叠蛋白反应（UPR），刺激GRP94的大量表达。GRP94的出现促进了肿瘤细胞的生长，加强了肿瘤组织内血管的生成。目的研究分析GRP94在子宫颈癌组织和正常子宫颈组织中表达水平及分布特点不同所具有的意义，为子宫颈癌的治疗提供理论依据及治疗线索。方法①通过质谱筛选出存在于正常子宫颈组织和子宫颈癌组织间的差异性蛋白质；②RT-PCR检测子宫颈癌组织中GRP94的表达情况；③Western Blot检测子宫颈癌组织及子宫颈癌细胞系中GRP94的表达情况；④免疫组化检测正常子宫颈组织、子宫颈癌组织中GRP94的表达情况；⑤免疫组化检测正常子宫颈脱落细胞及低度鳞状上皮内病变的子宫颈脱落细胞中GRP94的表达情况。结果⑴通过考马斯亮蓝PAGE胶结果显示正常子宫颈组织与子宫颈癌组织其差异性蛋白为主要集中于分子量大小为96KD左右的蛋白质，经切胶后质谱分析该主要差异性蛋白质为GRP94；⑵RT-PCR检测结果显示子宫颈癌组织中GRP94mRNA的表达较正常子宫颈组织明显升高，差异有统计学意义， p<0.05；⑶Western-blot法检测结果显示子宫颈癌组织中GRP94蛋白质的表达水平明显高于正常子宫颈组织，差异有统计学意义， p<0.05；⑷Western-blot法检测结果显示子宫颈癌细胞系（Hela、SiHa、CasKi）中GRP94蛋白质的表达水平高于正常子宫颈组织，差异有统计学意义， p<0.05；⑸免疫组化结果分析显示子宫颈癌组织中GRP94蛋白的表达高于正常子宫颈组织；（6）免疫组化结果分析显示GRP94在低度鳞状上皮内病变（LSIL）的子宫颈脱落细胞中表达明显高于正常的子宫颈脱落细胞，并表现出向细胞膜集中的趋势。结论GRP94作为正常子宫颈组织与子宫颈癌组织间的主要差异性蛋白在子宫颈癌组织中的表达明显高于正常子宫颈组织，且GRP94在子宫颈癌细胞系中亦呈高表达状态；GRP94在低度鳞状上皮内病变的子宫颈脱落细胞中的表达明显升高，且出现向细胞膜集中的趋势。

论文目录

• 英文缩略表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献