论文摘要
本文研究了建立大蒜（Allium staivum L.）化学诱导多倍体产生的两条途径,采用添加化学诱导剂于培养基上的离体愈伤诱导方法和蒜瓣茎尖注射化学诱导剂的活体注射方法,并筛选出合适的诱导途径、化学诱导剂和诱导剂浓度。⑴以G064品种的茎盘为外植体,在MS+2,4-D2.0+6-BA1.0上获得愈伤组织,在MS+NAA2.0+BA1.0培养基继代培养,通过愈伤组织在分化培养基上分化出不定芽。愈伤组织在继代培养过程中易发生变异,随着继代次数的增加分化能力下降,继代1～2次的愈伤组织分化能力最强。MS+6-BA3.0+IAA0.1是愈伤组织分化不定芽的最适培养基,平均每块愈伤组织分化3.6个不定芽。⑵将愈伤组织置于分别添加3个不同浓度的秋水仙素、二甲戊灵、氟乐灵溶液的固体培养基上,诱导多倍体发生。变异的诱导主要受诱导剂浓度和处理时间的影响。0.1%秋水仙素处理5d时,愈伤组织的存活率达到80.7%,分化率78.1%,四倍体的诱导率为4%。100μmol/L二甲戊灵处理5d愈伤组织的存活率达100%,是秋水仙素十分理想的替代品,四倍体的诱导率为3.1%。而氟乐灵具有强挥发性,对愈伤组织的伤害比较大,愈伤组织在高浓度短时间内存活率较高,但分化率只有53.7%,100μmol/L处理5d时仅获得四倍体苗1棵。⑶采用不同浓度的秋水仙素、二甲戊灵、氟乐灵溶液分别注射处理G064、G025、G091蒜瓣生长点,使大蒜叶片的下表皮气孔长度、宽度、面积和周长极显著增大,且气孔密度减小;通过对根尖染色体的观察,根尖染色体数目加倍,显示大蒜蒜瓣茎尖染色体被有效加倍。浓度为0.1%的秋水仙素溶液对G064和G091叶下表皮气孔的诱导效果最佳,处理G025大蒜茎尖最佳秋水仙素浓度则为0.05%;二甲戊灵100μmol/L对三种基因型大蒜茎尖的处理效果都比较理想;氟乐灵对三种基因型大蒜作用各有不同,短时间200μmol/L的处理浓度对G064有利,而G025在50μmol/L的诱导下叶片下表皮气孔大小与对照差异显著,G091由于其本身的受创易腐烂的特性,氟乐灵处理后气孔变异较小,但高浓度短时间和低浓度长时间处理效果比较好。分别观察大蒜3片叶的下表皮气孔发现,随着叶片的不断生长,诱导剂的处理效果呈下降趋势,对第一片叶的诱导效果最佳。蒜瓣茎尖注射诱导剂3d,在第三片叶发出前剥取茎尖接种诱导加倍植株,获得多倍体大蒜。⑷茎尖作为大蒜生长点,是分化能力最强的理想外植体。以蔗糖为糖源的MS+ GA10.0+6-BA3.0+NAA0.1是诱导剂处理后的茎尖的最适培养基,平均诱导率达82.4%。适当添加甘氨酸对茎尖的生长极为有利。