论文摘要
本研究人工合成了编码SARS 冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白的基因序列(1296bp),并构建了分别在大肠杆菌、毕赤酵母、哺乳动物细胞中表达的重组质粒pET-28a-N、pPIC9K-N、pIRES-N。证明上述重组质粒在大肠杆菌、毕赤酵母中均能表达SARS-CoV 核衣壳蛋白,另进行了该重组蛋白的表达条件优化和纯化。将核酸疫苗质粒pIRES-N 转染至BHK 细胞证明其表达SARS-CoV N 蛋白后,将该重组质粒免疫小鼠,证明能够诱导抗SARS-CoV N 蛋白抗体,流式细胞仪检测表明,鼠脾T 淋巴细胞数量增多,具有较好的细胞免疫诱导作用。将大量制备的上述核酸疫苗注射马体,免疫三次,并应用大肠杆菌、毕赤酵母中表达的核衣壳蛋白进行了加强免疫。证明了重组核酸疫苗免疫后,可诱导较高水平的抗SARS-CoV N 蛋白的抗体,另应用细菌和酵母中表达的N 蛋白追加免疫可诱导更高水平的抗SARS-CoV N 蛋白抗体,这为大量制备治疗用抗SARS 抗体奠定了良好基础。
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