论文摘要
目的观察脱氢卡维汀（dehydrocavidine,DC）对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）致雄性SD大鼠急性肝损伤及慢性肝纤维化的保护作用,并探讨其可能的分子机制。方法采用CCl4作为肝损伤造模剂,急性肝损伤预防试验中,分为溶剂对照组（ig植物油+ip生理盐水）、模型对照组（ig CCl4+ip生理盐水）、DC高剂量组（ig CCl4+ip DC 1mg/kg）、DC低剂量组（ig CCl4+ip DC 0.5 mg/kg）、甘草酸二铵（glycyrrhizin,GH）组（igCCl4+ip GH 20 mg/kg）及DC单独给药组（ig植物油+ip DC 1 mg/kg）,给药组大鼠在CCl4染毒前的48 h、24 h和2 h分别腹腔注射（intraperitoneal injection,ip）DC或GH;急性肝损伤治疗试验中,分为溶剂对照组（ig植物油+ip生理盐水）、模型对照组（igCCl4+ip生理盐水）、DC高剂量组（ig CCl4+ip DC 1 mg/kg）、DC低剂量组（ig CCl4+ip DC0.5 mg/kg）、GH组（ig CCl4+ip GH 20 mg/kg）及DC单独给药组（ig植物油+ip DC 1mg/kg）,大鼠在CCl4染毒后的2 h、24 h和48 h分别ip DC或GH;肝纤维化治疗试验中,大鼠灌胃（intragastric administration,ig）CCl4 12周建立肝纤维化模型,给药组从第5周开始ip DC进行治疗,3次/周,至12周末结束给药。各组大鼠均在给药结束后,腹腔戊巴比妥钠麻醉,随即腹主动脉采血检测血清丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase,LDH）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）及总胆红素（total bilirubin,TBIL）等生化指标。取大鼠肝组织作病理组织学检查并检测其中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GPX）等抗氧化酶活性和脂质过氧化产物丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平。其中,肝纤维化研究中,各组大鼠在末次给药后放于代谢笼中收集24 h尿液,分别测定肝纤维化大鼠肝组织和尿液中羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）含量。纤维化肝组织作天狼猩红特殊病理染色,运用基因芯片技术研究肝纤维化相关基因如细胞周期基因、细胞生长增殖和分化相关基因、热休克蛋白相关基因、转录因子和调控因子相关基因等的变化,并通过逆转录PCR技术验证基因芯片的部分结果。结果DC能显著降低急慢性肝损伤大鼠血清ALT、AST和TBIL等生化指标的水平（p＜0.05）;显著降低肝组织内MDA的水平（p＜0.05）,并显著提高肝组织内抗氧化酶的活性（p＜0.05）;急性肝损伤和肝纤维化H&E病理学染色评分DC组显著低于阳性对照组（p＜0.05）;DC长期给药后可减轻CCl4所致的大鼠肝纤维化程度,肝组织内HYP的含量及天狼猩红肝脏胶原显笆的病理评分也较阳性对照组显著降低（p＜0.05）;DC对CCl4引起的肝纤维化相关基因变化有着较强调控作用,可显著下调细胞周期基因中Cdk2、Cdk4、Cdkn1b和Cdkn2a;显著下调细胞生长、增殖和分化相关基因Mdm2的表达,并能显著上调Bcr的表达;显著下调Transporters相关基因中Abcb1、Abcg2和Rad50的表达;显著下调热休克蛋白相关基因中的Dnajb5、Dnajb6和Dnajc5的表达;显著下调转录因子和调控因子相关基因Arnt、Rarg和Nfkb2的表达;并可显著下调其他相关基因中5SrRNA、BAS2C、Bche、Grp58和Nrli3的表达,对Itgb1具有显著上调作用。用RT-PCR验证了DC对肝纤维化相关基因IL18、BcL2、Rad50和Cyp3a13的调控影响。结论DC通过降低CCl4致急性肝损伤大鼠体内氧化应激的水平,对大鼠急性肝损伤起到预防和治疗作用;DC通过降低CCl4致慢性肝纤维化大鼠体内氧化应激水平,调控肝纤维化相关基因,促进肝组织胶原降解,对大鼠肝纤维化起到治疗作用。