牛磺鹅去氧胆酸抗小鼠热应激的研究

论文摘要

牛磺鹅去氧胆酸（Taurochenodeoxycholic Acid,TCDCA）是动物胆汁中的一种结合胆汁酸,进来发现其具有抗炎、平喘、免疫调节等药理作用,但其在热应激领域的研究尚属空白。因此,本研究探讨了TCDCA对热应激小鼠免疫功能、内分泌及肝脏HSP70mRNA表达的影响,为将该活性成分开发成为抗热应激药物奠定基础。本课题将50只小鼠随机分成五组,分别为室温对照组、热应激模型组和高、中、低三个剂量的热应激给药组,TCDCA给药剂量分别为50、100、200mg/（kg·d）,置于（35.5±0.5）℃、相对湿度为60%的温箱中连续热应激7 d。检测TCDCA对热应激状态下小鼠脾脏指数、血清IgG、肠sIgA的影响;检测对外周血T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞的影响;测定小鼠外周血清中皮质醇、三碘甲腺原氨酸（T3）分泌的水平;检测小鼠肝脏组织HSP70 mRNA的相对表达水平。通过以上实验结果评价TCDCA的抗热应激作用。实验结果如下:（1）热应激引起小鼠脾脏指数显著下降（P<0.05）,血清IgG、肠sIgA显著升高（P<0.05）,外周血CD8+、CD19+百分率显著下降（P<0.05）,CD4+百分率变化不显著（P﹥0.05）,CD4+/CD8+比值显著升高（P<0.05）,表明热应激导致小鼠机体免疫功能发生紊乱。TCDCA对热应激小鼠脾脏指数无显著影响;但能显著抑制热应激引起的血清IgG含量、小肠sIgA含量升高（P<0.05）和显著提高外周血CD8+、CD19+百分率（P<0.05）,同时能够调节CD4+/CD8+比值到正常水平。（2）热应激条件下,小鼠血清皮质醇含量显著降低（P﹤0.05）,T3含量极显著升高（P﹤0.01）,给予TCDCA能够显著地增加热应激小鼠血清皮质醇含量;显著性抑制小鼠血清T3含量的升高（P﹤0.05）。（3）热应激条件下,小鼠肝脏组织HSP70 mRNA相对表达显著性增加（P﹤0.05）;TCDCA能够显著性抑制肝脏组织HSP70 mRNA的增加（P﹤0.05）。综上可见,TCDCA对热应激导致的小鼠免疫功能紊乱具有明显的改善作用,并可以调节并维持热应激小鼠血清皮质醇、T3含量及肝脏组织HSP70 mRNA的表达相对稳定。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 1.1 热应激与应激概述
• 1.1.1 应激概述
• 1.1.2 热应激概述
• 1.2 热应激对动物机体的影响
• 1.2.1 热应激对内分泌机能的影响
• 1.2.1.1 热应激对甲状腺机能的影响
• 1.2.1.2 热应激对肾上腺机能的影响
• 1.2.2 热应激对免疫功能的影响
• 1.2.2.1 热应激对免疫器官的影响
• 1.2.2.2 热应激对体液免疫的影响
• 1.2.2.3 热应激对细胞免疫的影响
• 1.2.2.4 热应激对肠道黏膜免疫的损伤
• 1.2.3 热应激对采食量的影响
• 1.2.4 热应激对生产性能、繁殖性能的影响
• 1.2.5 热应激对呼吸机能和体温的影响
• 1.2.6 热应激对内脏各器官组织形态学的影响
• 1.3 热应激与热休克蛋白70（HSP70）
• 1.4 抗热应激药物的研究进展
• 1.5 TCDCA 现代药理学研究进展
• 1.6 本课题研究的目的、意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 试验动物
• 2.1.2 化学试剂
• 2.1.3 溶液配制
• 2.1.4 仪器设备
• 2.1.5 数据分析
• 2.2 方法
• 2.2.1 动物模型的建立及给药
• 2.2.2 样品采集
• 2.2.3 TCDCA 对热应激小鼠血清甲状腺激素（T3）和皮质醇的影响的检测
• 2.2.3.1 小鼠血清中皮质醇含量的放射免疫法检测
• 2.2.3.2 小鼠血清中甲状腺激素（T3）含量的放射免疫法检测
• 2.2.4 TCDCA 对热应激小鼠免疫功能影响的检测
• 2.2.4.1 TCDCA 对热应激小鼠脾脏指数影响的检测
• +、CD8⁺和 CD19⁺淋巴细胞含量影响的测定'>2.2.4.2 TCDCA 对热应激小鼠外周血中 CD4⁺、CD8⁺和 CD19⁺淋巴细胞含量影响的测定
• 2.2.4.3 TCDCA 对热应激小鼠小肠sIgA 含量影响的测定
• 2.2.4.4 TCDCA 对热应激小鼠小肠血清中IgG 含量影响的测定
• 2.2.5 TCDCA 对热应激小鼠肝脏HSP70 表达量影响的实时荧光定量检测
• 2.2.5.1 小鼠肝脏总m RNA 的提取
• 2.2.5.2 引物设计及RT-PCR 扩增
• 2.2.5.3 HSP70 和1851RNA 基因的Real Time PCR 检测
• 3 结果与分析
• 3.1 TCDCA 对热应激小鼠血清甲状腺激素（T3）和皮质醇的影响
• 3.2 TCDCA 对热应激小鼠免疫功能影响
• 3.2.1 TCDCA 对热应激小鼠脾脏指数的影响
• +、CD8⁺和CD19⁺淋巴细胞含量影响'>3.2.2 TCDCA 对热应激小鼠外周血中CD4⁺、CD8⁺和CD19⁺淋巴细胞含量影响
• 3.2.3 TCDCA 对热应激小鼠肠分泌型免疫球蛋白A（sIgA） 的影响
• 3.2.4 TCDCA 对热应激小鼠血清中IgG 含量影响的检测
• 3.4 TCDCA 对热应激小鼠肝脏HSP70 表达量影响
• 3.4.1 总RNA 提取的完整性及纯度检测
• 3.4.2 HSP70 基因和1851RNA 基因表达实时荧光定量RT-PCR 扩增曲线、熔解曲线、扩增效率曲线
• 3.4.3 HSP70 Real Time PCR 的检测结果
• 4 讨论
• 4.1 TCDCA 对热应激小鼠血清甲状腺激素（T3）和皮质醇的影响
• 4.2 TCDCA 对热应激小鼠免疫功能影响
• 4.2.1 TCDCA 对热应激小鼠脾脏指数的影响
• +和 CD8⁺淋巴细胞影响'>4.2.2 TCDCA 对热应激小鼠外周血中 CD4⁺和 CD8⁺淋巴细胞影响
• 4.2.3 TCDCA 对热应激小鼠肠分泌型免疫球蛋白 A（sIgA） 的影响
• 4.2.4 TCDCA 对热应激小鼠血清中 IgG 含量影响的
• 4.3 TCDCA 对热应激小鼠肝脏组织 HSP70mRNA 的表达量的影响
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文情况
• 硕士学位论文内容简介及自评