论文摘要
目的:观察人肝癌细胞株HepG2（Human hepatocellular carcinoma cell）有无抗失巢凋亡能力;血卟啉经超声激活后对HepG2细胞抗失巢凋亡能力的影响,并探讨其可能机制。方法: （1）以软琼脂集落形成实验观察HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞株HUVEC（Human umbilical vein endothelial cell）在失巢状态下的生长情况,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测HepG2细胞和HUVEC细胞的失巢凋亡情况;（2）将HepG2细胞随机分为4组:①血卟啉组,培养液中加入浓度为1.5mg/ml的血卟啉溶液40μl后避光孵育30s;②超声辐照组,用1.0MHz、1.5W/cm2超声辐照30s;③血卟啉+超声辐照组,加入相同剂量血卟啉溶液后避光孵育30s,予同等强度超声辐照30s;④空白对照组。各组处理后细胞以软琼脂集落形成实验观察其失巢生长情况,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测其失巢凋亡情况;（3）在上述4组的基础上增设血卟啉+组氨酸+超声辐照组,加入浓度为50μg/ml的组氨酸溶液31μl后同样方法予以血卟啉与超声联合处理。各组处理后细胞以紫外可见光分光光度计检测1,3-二苯基异苯并呋喃（1,3-diphenylisobenzofuran, DPBF）相对消耗量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,逆转录PCR技术（RT-PCR）检测骨桥蛋白（osteopontin,OPN）的mRNA表达,蛋白质斑迹法（Western blot）检测OPN的蛋白表达。结果: （1）倒置显微镜显示HepG2细胞在失巢状态下软琼脂中仍能生长,形成大小不等的细胞集落,而HUVEC细胞则无细胞集落形成,琼脂糖凝胶电泳显示HUVEC细胞出现了细胞凋亡特征性DNA ladder,流式细胞仪检测结果显示HUVEC细胞的凋亡率明显高于HepG2细胞;（2）血卟啉+超声辐照组HepG2细胞在软琼脂中形成的细胞集落数明显少于其余3组,琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡特征性DNA ladder,流式细胞仪结果显示其细胞凋亡率明显高于其余3组;（3）紫外可见光分光光度计和流式细胞仪结果显示血卟啉+超声辐照组的DPBF相对消耗量和细胞凋亡率明显高于其余4组, RT-PCR及Western blot检测结果显示其HepG2细胞的OPN表达明显低于其余4组。结论: （1）HepG2细胞在失巢状态仍然能够生长,具有抗失巢凋亡的能力。（2）血卟啉经超声激活后能够抑制HepG2细胞的抗失巢凋亡能力,使其发生失巢凋亡。（3）血卟啉经超声激活后能够产生单线态氧,从而降低HepG2细胞的OPN表达,可能是其抑制HepG2细胞抗失巢凋亡能力的重要机制之一。
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