论文摘要
利用杂交瘤细胞技术，以表达的Asial型口蹄疫病毒VP1蛋白免疫BALB／c小鼠，无菌条件下取小鼠脾细胞与SP2／0细胞进行细胞融合。经多次克隆和间接ELISA筛选，获得三株能分泌抗Asial型口蹄疫的单克隆杂交瘤细胞株，并对其特性作了鉴定。在此基础上，利用胶体金免疫层析技术制备了Asial型口蹄疫病毒单抗胶体金诊断试纸条。经单克隆抗体亚类鉴定，三株单克隆抗体依次为IgG1、IgG2a和IgG2b。杂交瘤细胞株的染色体计数为104条，在杂交瘤细胞染色体范围内。用间接ELISA对腹水和细胞上清液中单抗效价进行测定，三株单抗的腹水中单抗效价≥1∶106，而细胞上清中单抗效价≥1∶104。用叠加实验对3株单抗的抗原位点进行了分析，发现三株单抗针对2个不同的抗原位点，其中2株单抗作用于同一抗原表位。对所获得的三株单抗经SDS-PAGE电泳，结果显示，所有单抗重链的分子量均为45kD左右，轻链的分子量为25kD左右。三株杂交瘤细胞和注射小鼠腹腔内的杂交瘤细胞经过5次连续传代后，用间接ELISA对每代次的细胞上清中的单抗效价进行了检测，传代细胞每代的单抗效价稳定在1∶104左右，腹水的抗体效价稳定于1∶105～106。用Asial单抗分别与O、A、C、Asial型病毒抗原和Asial重组抗原进行反应，结果三株单抗均与Asial型口蹄疫病毒和表达VP1蛋白有特异的反应，而与C、O和A型口蹄疫抗原不发生交叉反应。利用获得的单抗成功研制出了检测Asial型口蹄疫病毒抗原的金标快速诊断试纸条。用该试纸条分别对A、O、C和Asial型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原等87份田间样品进行了检测，发现检测Asial型口蹄疫病毒抗原的试纸条出现2条明显的条带，而A、O、C型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原只出现对照线，检测线没有条带，说明该试纸条不口蹄疫病毒A、O、C型以及猪水泡病病毒抗原发生反应，特异性强。用该试纸条对口蹄疫细胞毒液(10-7TCID50)的10倍系列稀释液进行了检测，最低可以检测到大约10-4TCID50。初步实验确定该试纸条在4℃、37℃和室温下的有效期为4个月。对于Asial型口蹄疫病毒金标试纸条的特性和应用Asial型口蹄疫病毒单克隆抗体的诊断价值还有待进一步的研究。