论文摘要
目的建立大鼠吗啡条件性位置偏爱（ conditioned place preference,CPP）易感性差异模型;通过研究高低吗啡CPP易感性大鼠中脑腹侧背盖区（ventral tegmental area,VTA）、伏隔核（nucleus accumben,NAc）、内侧前额皮质（medial prefrontal cortex,mPFC）区的多巴胺D2受体（dopamine D2 receptor,D2R）和多巴胺转运体（dopamine transportor, DAT）差异及动态变化,以探讨吗啡依赖精神依赖易感性差异的多巴胺机制。方法1.实验动物和分组160只同品系雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为实验组130只和生理盐水对照组30只。2.动物模型的建立实验组:腹腔注射盐酸吗啡,2次/天,起始剂量为5mg.kg-1.次-1,逐日递增5mg.kg-1.次-1,至第10天为50mg.kg-1.次-1,对照组同期注射相同体积的生理盐水。3.CPP测评用两箱式CPP实验箱进行CPP训练,训练采用倾向性程序（biased procedure）,CPP测定时间为适应第2、3天、吗啡注射第9天和处死前各一次,取适应的第2、3天大鼠在自然偏爱侧停留时间的平均值为预测试值。4.根据CPP值再分组根据吗啡处理后CPP值（伴药测减去预测试值）将大鼠分为高、中、低偏爱组,各占总数的20%、60%、20%。其中高、低偏爱组大鼠进入以下研究。5.戒断症状的评定处理因素终止后第3天评定高、低偏爱两组大鼠20分钟内戒断体征,包括跳跃（jumping）、湿狗样抖动（wet dog shakes）、直立（rearing）、躯体拉伸（strething）和腹泻（diarrhea）。6.D2R和DAT的测定实验组于末次注射后3h（依赖状态,3H）、72h（戒断3天组,JD3）和第14天（戒断14天组,JD14）,分别各处死高偏爱组、低偏爱组和对照组各8只,灌注、取脑、冰冻切片并选取含有VTA、NAc和mPFC的脑片,利用组织原位杂交技术检测D2R mRNA和DAT mRNA在各脑区的表达。7.统计方法各组大鼠CPP值以条件训练前后在伴药侧停留时间差值（s）作为统计指标。两均数之间的比较采用独立样本t检验;率的比较采用Fisher’s Exact Probability test卡方检验。均数间的多重比较,采用单因素方差分析,若存在差异,则进一步进行两两多重比较;采用Levene检验进行方差一致性检验,若方差齐时,用Least-significant difference （LSD）方法,若方差不齐时用Tamhane’s T2方法。当P<0.05被认为统计学上有显著性的差异。所有的统计分析均采用SPSS12.0软件包完成。结果1.高偏爱组的非自然偏爱侧（伴药侧）预测试值为236.4±58.2秒,低偏爱组的非自然偏爱侧的预测试值273.1±75.6秒,对照组的预测试值为243.1±75.6秒,三组预测试值无统计学差异（ F =0.783,P=0.470）;CPP训练后,在3H时高偏爱组的CPP值与预测试的差值为506.8±108.5秒,而低偏爱组的差值为100.3±74.4秒,高偏爱组高于低偏爱组（F=45.073,P=0.000）;在JD3和第JD14,高偏爱组的CPP值与预测试的差值均高于低偏爱组（F=24.235～47.989,P=0.000）;2.在JD3,高偏爱组、低偏爱组和对照组戒断体征均有显著性差异（F=92.0～1218.35,P =0.000）;两两比较结果显示,高偏爱组的湿狗样抖动、直立、躯体拉伸和跳跃等可数症状均高于低偏爱组（P =0.000～0.001）,高偏爱组的不可数体征腹泻高于低偏爱组（χ2=24.942, P =0.000）;除躯体拉伸症状低偏爱组与对照组无显著性差异外（P >0.005）,其余四项症状均高于对照组（P =0.000～0.002）。3.末次用药后3小时,高偏爱、低偏爱两组VTA、NAc、mPFC三个脑区D2R mRNA灰度值均高于对照组（F=158.80～247.30,P=0.000）,高偏爱组各脑区明显高于低偏爱组（P=0.000）;在JD3和JD14,高偏爱、低偏爱两组的三个脑区D2R mRNA灰度值明显高于对照组（F=27.03～155.52,P=0.000）;两两比较高偏爱组的D2R mRNA灰度值明显均高于低偏爱组（P=0.000）。4.在3H,高偏爱、低偏爱组的三个脑区DAT mRNA灰度值均明显高于对照组,并且高偏爱组的DAT mRNA灰度值明显高于低偏爱组（P=0.000）;在JD3,高偏爱、低偏爱组灰度值均高于对照组（P=0.000）,高偏爱组除VTA区外,mPFC、NAc区的灰度值均高于低偏爱组（P=0.000～0.002）;在JD14,三组的mPFC区DAT mRNA灰度值无差异（P>0.05）;高偏爱组NAc区DAT mRNA灰度值高于低偏爱组（P=0.001）,而低偏爱组与对照组无明显差异;高偏爱、低偏爱两组VTA区的DAT mRNA灰度值无明显差异。结论1.慢性吗啡处理大鼠进行CPP训练后部分大鼠形成高偏爱,部分大鼠形成低偏爱,两者CPP值差异显著,表明该方式可以可靠的建立吗啡CPP易感性差异动物模型。2.高偏爱大鼠mPFC、NAc、VTA脑区的D2R mRNA表达低于低偏爱,上述脑区的D2R mRNA表达低下可能与吗啡高易感性有关。3.高偏爱大鼠mPFC、NAc、VTA脑区的DAT mRNA表达低于低偏爱大鼠,上述脑区的DAT mRNA表达低下可能与吗啡高易感性有关。4.mPFC、NAc、VTA脑区的D2R、DAT存在复杂的相互调节相互作用共同影响大鼠的吗啡易感性,可能构成了吗啡易感性差异的神经生物学基础。
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标签：吗啡依赖论文; 条件性位置偏爱论文; 易感性论文; 受体论文; 多巴胺受体论文; 多巴胺转运体论文; 原位杂交论文;