Th17细胞及IL-17与糖尿病肾病的关系

论文摘要

目的：（1）制备SD大鼠的糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN）模型,检测Th17细胞亚群数量及IL-17的表达水平,探讨Th17细胞及IL-17在DN发病中的作用和DN的免疫炎症机制；（2）开展以医院为基础的病例对照研究,从细胞因子分泌水平和转录调控水平层面探讨IL-17与DN的关系,并在环境-行为-遗传-免疫因素的多变量模式下,探讨IL-17与2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者继发DN的关系,筛选T2DM继发DN及DN分期的预测因子。为探寻DN的炎性标志物,丰富和完善DM及其慢性并发症的“炎性学说”,开发针对Th17细胞的靶向免疫治疗提供参考；并为DN的早期预测、易感人群筛选以及开展有针对性的健康干预提供一定的理论依据。方法：（1）动物实验：尾静脉注射链脲佐菌素（STZ）制备DN大鼠模型。造模成功的大鼠按血糖和体重分层后,随机分为金芪治疗组、胰岛素治疗组和模型组,另选取正常大鼠作为对照。采用流式细胞术（FCM）检测各组外周血单核细胞（PBMCs）表面IL-23R+CD4+/CD4+比例,以了解Th17细胞的相对数量。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组血浆IL-23、IL-17的水平；光镜和电镜下观察各组大鼠肾脏病理组织学改变。通过免疫组化法检测大鼠肾皮质内TNF-αTGF-β1和IL-17的表达。（2）以医院为基础的病例对照研究：研究对象共包括487名T2DM患者,其中病例组（DN）170人,对照组（未患DN的T2DM患者）317人。问卷调查研究对象的一般人口学信息、现病史、家族史、生活方式和行为习惯等项目,同时进行体格检查和实验室检查；采用ELISA检测血浆IL-17的水平；采用RT-PCR技术检测外周血中IL-17 mRNA的表达水平。采用非条件Logistic回归模型、有序资料的累积Logit模型筛选DN及DN分期的危险因素,构建基于环境-行为-遗传-免疫因素的多变量预测模型。结果：（1）动物实验：成功建立了STZ诱导的DN大鼠模型,实验过程中各组大鼠胰岛功能未出现自发性恢复。模型组大鼠的尿微量白蛋白排出量高于正常对照组,成模18周时SD大鼠已经出现了DN的早期临床表现。外周血中IL-23R+CD4+/CD4+比例、血浆IL-17、IL-23水平在DM组中高于对照组,DN大鼠肾皮质中IL-17亦存在高表达。Th17细胞及炎性因子IL-17、IL-23对尿微量白蛋白产生正向影响。DN大鼠肾皮质TGF-β1和TNF-α表达量均高于正常对照组。TGF-β、TNF-a表达水平与血浆IL-23R+CD4+/CD4+细胞比例呈正相关,与血浆IL-17浓度、肾脏IL-17表达水平亦存在正相关。提示Th17细胞分化及其参与的炎性反应过程可能与DN的进展有关。（2）以医院为基础的病例对照研究：血浆IL-17水平、外周血IL-17mRNA表达水平在临床白蛋白尿组最高,其次是微量白蛋白尿组,正常白蛋白尿组最低,提示IL-17可能与DN的进展有关。DM病程长、并发视网膜病变、血压控制不良、中心性肥胖、血浆IL-17水平升高与T2DM继发DN的高风险有关。分别构建了T2DM患者继发DN及DN分期的多因素预测模型。预测模型的灵敏度、特异度较高,预测性能较好。结论：T2DM继发DN是多因素共同作用的结果,Th17细胞参与的炎性反应机制可能是DN持续发展的关键因素,IL-17可能参与了DN的发病过程。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、Th17细胞及IL-17等炎性因子与DN关系的动物实验研究
• 1.1 材料和方法
• 1.1.1 材料和仪器
• 1.1.2 实验方法
• 1.1.3 统计分析方法
• 1.2 结果
• 1.2.1 成功制备DN大鼠模型
• 1.2.2 各组大鼠肾重/体重比值的比较
• 1.2.3 各组大鼠生化指标的比较
• 1.2.4 各组大鼠血清胰岛素的比较
• 1.2.5 各组大鼠外周血IL-23R+CD4+/CD4+T细胞比例的比较
• 1.2.6 各组大鼠血浆IL-17、IL-23水平的比较
• 1.2.7 各组大鼠肾脏病理形态学结果
• 1.2.8 各组大鼠肾脏IL-17、TGF-β1、TNF-α表达水平的比较
• 1.2.9 指标间的关联性分析
• 1.3 讨论
• 1.3.1 STZ诱导下DN大鼠模型的制备
• 1.3.2 实验中各项生化指标的变化
• 1.3.3 免疫、炎症与DN
• 1.3.4 DN模型大鼠的肾脏病理形态学变化
• 1.4 小结
• 二、IL-17及其它因素与DN关系的病例对照研究
• 2.1 对象和方法
• 2.1.1 研究对象的选择
• 2.1.2 资料的收集
• 2.1.3 血标本的采集和保存
• 2.1.4 实验室方法和步骤
• 2.1.5 统计分析方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 病例与对照的基本特征分布
• 2.2.2 DM疾病特征及治疗措施等与DN
• 2.2.3 DM的并发症与DN
• 2.2.4 高血压、高脂血症与DN
• 2.2.5 疾病家族史与DN
• 2.2.6 行为方式、生活习惯与DN
• 2.2.7 肥胖与DN
• 2.2.8 调查时的血压水平与DN
• 2.2.9 调查时的血液生化指标与DN
• 2.2.10 IL-17与DN
• 2.2.11 拟合环境-行为-遗传-免疫因素的DN预测模型
• 2.2.12 拟合环境-行为-遗传-免疫因素的DN分期预测模型
• 2.3 讨论
• 2.3.1 关于研究方法和分析方法
• 2.3.2 质量控制
• 2.3.3 T2DM患者发生DN的危险因素
• 2.4 小结
• 全文结论
• 论文创新点
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述 糖尿病肾病炎性相关因素研究进展
• 综述参考文献
• 致谢