论文题目: 人子宫内膜癌细胞系的建立及其特异性结合短肽的筛选
论文类型: 博士论文
论文专业: 妇产科病理
作者: 陆琳
导师: 钟雪云,王自能
关键词: 子宫内膜癌,细胞系,噬菌体展示,短肽,全细胞筛选,决定簇,靶向药物
文献来源: 暨南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:建立人子宫内膜腺癌细胞系EAC,检测其生物学特性和可能肿瘤标志物,为子宫内膜癌的基础和临床研究提供了良好的材料。并利用噬菌体随机十二肽库筛选出能够和子宫内膜腺癌细胞系EAC的特异性结合的短肽序列,分析序列组成,找出能够和子宫内膜腺癌细胞特异性结合的配体蛋白质及分析这些蛋白与细胞结合的氨基酸决定簇位点及方式,为研究短肽在肿瘤靶向药物开发和肿瘤特异性定位标志方面提供研究资料。 方法:将人子宫内膜腺癌组织块接种于裸鼠背部皮下,待裸鼠成瘤后将移植瘤做原代培养,稳定传代后,对其细胞形态,超微结构,生长曲线,致瘤率,染色体,及雌孕激素受体进行观察检测,并用RT-PCR技术在mRNA水平检测了PTEN基因的转录水平和PCR产物测序,及用免疫组化和Western blot方法在蛋白质表达水平检测了VEGF的表达水平。并用噬菌体随机十二肽库对体外培养的人子宫内膜癌细胞EAC进行5轮全细胞筛选。在五轮细胞筛选后的两部分噬菌体库中,即细胞表面结合部分和内化入细胞部分,分别随机挑选18个以上噬菌体单克隆进行测序。同时对随机挑选的噬菌体单克隆进行与野生型VcsM13噬菌体的竞争结合实验及对HepG-2、MCF-7、JEC、SWO38、NCI-H460,HLO2六种人类不同组织来源细胞系的特异性结合分析,在测序结果中找出及分析出现频率高的短肽序列和其可能的蛋白质结构。 结果:EAC细胞系目前已传代61代,同时液氮保种,复苏良好。该细胞系生长快,稳定传代,形态学特征符合腺上皮恶性肿瘤细胞特征。染色体检查为超二倍体。雌孕激素受体检查阴性。致瘤率100%,移植瘤病理学特征与原细胞系相似。EAC细胞中的PTEN mRNA水平高于正常,测序结果显示转录水平未见突变。VEGF蛋白表达水平高。经过噬菌体5轮全细胞筛选后,各部分噬菌体库的回收量均可达到10~5～10~6数量级,且竞争结合分析及细胞特异性结合分析均显示筛选后的噬菌体克隆及噬菌体库对子宫内膜癌细胞具有明显的特异性结合。测序结果显示有一条序列出现频率较高,序列-SNPTTPDHLWRG-在表面结合和内化释放
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
材料与试剂
一、主要实验材料及试剂
二、主要试剂的配置方法
三、主要实验仪器及设备
技术路线
第一部分
一、实验方法
二、实验结果
三、讨论
第二部分
一、实验方法
二、实验结果及讨论
三、结论
第三部分
一、实验方法
二、实验结果
三、讨论
第四部分
一、实验方法
二、实验结果
三、讨论
结论
参考文献
附录
缩略词
研究生在读期间发表的文章
致谢
发布时间: 2005-10-27
参考文献
- [1].噬菌体肽库展示技术在肿瘤逃逸相关CD59基因活性位点的筛选及构建中的应用研究[D]. 程颖.青岛大学2007
相关论文
- [1].携带野生型PTEN基因的重组腺病毒（Ad-PTEN）治疗子宫内膜癌的实验研究[D]. 刘玉环.第二军医大学2004
- [2].KiSS-1基因抑制子宫内膜癌转移的研究[D]. 孟丽荣.中国医科大学2005
- [3].子宫内膜癌的三维超声诊断与血管形成及其显像方面的研究[D]. 葛玲.山东大学2005
- [4].胰岛素与子宫内膜癌发生的相关研究[D]. 赵敬.天津医科大学2006
- [5].子宫内膜癌的临床与实验研究[D]. 晁红霞.中国协和医科大学1999
- [6].子宫内膜癌的临床和实验研究[D]. 周春晓.中国协和医科大学1999
- [7].Survivin对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及其相关的信号转导通路[D]. 艾志宏.复旦大学2006
- [8].子宫内膜癌孕激素耐药机制的研究[D]. 赵书君.复旦大学2006
- [9].人正常子宫内膜与子宫内膜癌树突状细胞的研究[D]. 贾建军.暨南大学2007
- [10].子宫内膜癌中雌激素受体与MAPK信号通路间的调控[D]. 蔡斌.上海交通大学2008