氯离子通道CLC-3和线粒体在三苯氧胺诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡中的作用及分子机制的研究

论文摘要

随着对乳腺癌发生发展过程中分子机制和基因改变的深入认识,生物治疗已逐渐成为临床上重要而有效的辅助治疗手段,目前已经鉴定出了许治疗的基因靶点,它们调节凋亡、增殖和细胞信号传导。反义寡核苷酸提供了接近肿瘤发展过程中尤其是那些无法靠小分子物质或抗体抑制的靶基因的途径。更好的化学修饰过的反义核苷酸能够增加抗核酸酶降解的能力,延长组织半衰期和提高调度。实际上,最近的临床实验已经确定这类药物具有重要的抑制靶基因表达的能力。本实验的目的是将三苯氧胺（TAM）与靶向氯离子通道CLC-3反义核苷酸链分别单独及联合作用于MCF-7乳腺癌细胞,研究它们对于肿瘤细胞增殖情况的影响。TAM为雌激素受体阻断剂,也是非特异性的氯通道CLC-3阻断剂,本实验并将对TAM、氯离子通道CLC-3反义核苷酸作用于MCF-7时,其抗肿瘤作用发生的机制进行进一步的探讨。1.我们先采用免疫组织化学的方法对临床乳腺癌的标本进行染色,发现乳腺癌组织中表达氯离子通道CLC-3,并且良、恶性组织之间有显著性差异。2.然后我们对ClC-3反义核苷酸链进行设计,并用RT-PCR方法进行鉴定,得到反义的CLC-3核苷酸链。用MTT比色法分别测定不同浓度TAM对MCF-7细胞增殖的抑制率,选取最佳给药浓度（预实验）。然后加入ClC-3反义核苷酸链对TAM10um和20um给药时对细胞增殖的抑制情况进行测定。发现三苯氧胺对MCF-7细胞能够以剂量依赖方式对其增殖有抑制,且ClC-3反义核苷酸链加大了三苯氧胺的对细胞增殖的抑制作用,说明其对三苯氧胺有协同作用。同时我们用脱氧核糖核苷酸末

论文目录

• 英文缩写词表
• 前言
• 文献综述
• 第一章 氯离子通道
• 一、离子通道的研究现状及其与疾病的关系
• 二、与乳腺癌有关的离子通道
• 三、氯离子通道的研究现状
• 四、CLC-3 的研究进展
• 五、线粒体中的氯离子通道
• 六、氯通道作为肿瘤治疗的药物靶点
• 第二章 雌激素、雌激素受体及其作用机制
• 一、雌激素受体（ER）的结构与功能
• 二、雌激素作用的信号转导途径
• 三、线粒体中的雌激素受体及其作用
• 第三章 三苯氧胺与凋亡
• 一、蛋白激酶C（PKC）在TAM 介导的细胞凋亡中的作用
• 二、钙调蛋白和钙离子信号在TAM 的抗癌机制中的作用
• 三、神经酰胺在TAM 所介导的细胞凋亡机制中的作用
• 四、TAM 对c-Myc 的诱导作用
• 五、MAP 激酶在TAM 所诱导的细胞凋亡中的作用
• 六、凋亡蛋白酶在TAM 所介导的细胞凋亡中的作用
• 七、线粒体在TAM 介导的细胞凋亡中的作用
• 八、转化生长因子在TAM 所诱导的生长抑制中的作用
• 九、TAM 和生物膜之间的相互作用
• 十、TAM 所诱导的细胞凋亡的其他机制
• 第四章 线粒体与细胞凋亡
• 一、线粒体膜与凋亡
• 二、细胞色素C 在凋亡中的作用
• 三、线粒体与Bcl-2
• 四、线粒体内Ca2 + 释放与凋亡
• 五、线粒体DNA（mtDNA） 与凋亡
• 六、线粒体中的谷胱苷肽与凋亡
• 第五章 氧化应激诱导细胞凋亡的分子机制
• 一、ROS 活化NF-KB 并诱导NF-KB 表达
• 二、线粒体介导的细胞凋亡
• 三、ROS 损伤DNA,激活P53 诱导细胞凋亡
• 四、ROS 激活SAPK 通路, 介导细胞凋亡
• 实验部分
• 主要实验仪器
• 主要实验试剂
• 第一部分 氯离子通道CLC-3 在乳腺癌中的表达
• 1 方法
• 2. 结果
• 第二部分 CLC-3 反义核苷酸链的设计与鉴定
• 1. 方法
• 2. 结果
• 第三部分 TAM 及靶向CLC-3 反义核苷酸对MCF-7（ERα+）增殖的影响
• 1. MTT 比色分析法
• 2. 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL 染色）
• 3 DNA ladder
• 第四部分 TAM 及靶向CLC-3 反义核苷酸对MCF-7（ERα+）增殖抑制作用的机制
• 1 雌激素受体α的免疫细胞化学染色
• 2 RT-PCR 检测Bcl-2、Bax 和CLC-3mRNA 的表达
• 3 细胞内ROS 水平的检测
• 4. 线粒体内GSH 的测定
• 5 细胞色素C 的蛋白分析 Western-blot
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表文章
• 致谢
• 中文摘要
• ABSTRACT