增强造血干/祖细胞归巢及其造血重建能力的可行性移植策略研究

论文摘要

目的比较不同来源的人HS/PC归巢能力的差异性并深入探讨iBMI技术对人UCB源HS/PC归巢潜能、植入率、移植后造血和免疫功能重建的影响。方法将不同数量的人BM、mPB及UCB来源的CD34+细胞（1×103、1×104、0.5×105、1×105、5×105）分别经iVI和iBMI途径移植入经亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠。通过PCR技术、组织冰冻切片、流式细胞术及活体成像技术观察CFSE标记的不同来源的人CD34+细胞在受鼠体内的时序性分布;在此基础上我们着重比较UCB来源的CD34+细胞于iVI-UCBT和iBMI-UCBT受鼠体内植活水平的剂量依赖性、动态植活率、造血与免疫功能恢复情况、体外细胞克隆形成能力及二次重建能力。结果①不同来源的人HS/PC归巢能力源间差异无统计学意义（P＞0.05）;②对CFSE标记的不同来源的人CD34+细胞体内动力学研究表明其在受鼠体内分布呈现明显的趋化特征,归巢早期（1h）细胞于iVI组受鼠体内呈现非特异性分布,24h时则集中在周身骨骼（尤以长骨和扁骨为著）部位,而iBMI组受鼠细胞输注后即立刻向邻近的扁骨迁移,24h内则可到达周身其他部位骨骼,在此过程中滞留于肝脏、肺脏的细胞明显低于iVI组。直至输注后72h荧光细胞在两组受鼠体内的分布情况基本一致,主要集中在造血能力丰富的扁骨部位。③iBMI组受鼠体内人CD34+细胞的归巢效率为（12±3.91%）,约为iVI组人CD34+细胞归巢效率的10倍（1.5±0.15%）;④不同数量的人UCB-CD34+细胞经iBMI移植入NOD/SCID小鼠后,8周时其植活良好且植活水平呈剂量依赖性。分别经iVI和iBMI输注同一来源的人UCB-CD34+细胞1.0×105,8周时两组间人造血细胞植活水平分别为（44.063±20.095）%和（45.881±22.316）%,差异无统计学意义（P＞0.05）;而将CD34+细胞降至1.0×104时,则经iBMI输注的人UCB-CD34+细胞植活水平（54.019±31.338）%显著优于iVI途径（12.197±10.350）%,P＜0.01);当CD34+细胞输注量降至1.0×103时,仅有iBMI输注组小鼠能见到人UCB-CD34+细胞植活,且植活部位通常为非输注部位骨骼。⑤UCB-CD34+细胞在受鼠体内能够长期植活并向多系分化,主要以向B系和髓系分化为主,移植后5周iVI组与iBMI组各系抗原表达水平均低于移植后3周及8周相应数值;外周血、脾脏及骨髓中人HS/PC植活率变化趋势基本一致,移植后8周iBMI组人CD45+细胞在上述部位的比例明显高于iVI组相应数值。结论人HS/PC归巢能力无源间差异性;iBMI移植策略能够减少细胞在肝肺的扣留,使之迅速归巢到达骨髓造血微环境,从而高效增强其长期植活水平,促进多系造血重建。

论文目录

• 英文缩略语
• 前言
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分
• 材料与方法
• 实验结果
• 第二部分
• 材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 在读硕士期间撰写和发表的文章
• 致谢