首页> 正文

家蝇蛆粉对ApoE-/-小鼠抗动脉粥样硬化作用及其机制的探讨

2020-12-14阅读(549)

家蝇蛆粉对ApoE-/-小鼠抗动脉粥样硬化作用及其机制的探讨

论文摘要

动脉粥样硬化（atherosderosis,AS）指动脉及其分支的脉管壁内膜及内膜下的脂质沉着,同时伴有中层平滑肌细胞移行至内膜下增殖,使内膜增厚,形成黄色或灰黄色状如粥样物质的斑块。动脉粥样硬化可导致心脑血管疾病,严重危害人类的健康。我国动脉粥样硬化及其引发的心脑血管疾病发病率逐年上升,且发病呈“年轻化”的趋势。动脉粥样硬化已为医学界所重视,但是其治疗的药物疗效有限且需要长期使用。目前,临床上广泛使用的抗动脉粥样硬化药物如辛伐他汀、普罗布考等均存在不容忽视的毒副作用,其长期疗效在临床上也备受质疑。因此,寻找天然、无毒、有效的抗动脉粥样硬化药物是临床药学的研究热点之一。家蝇蛆（Housefly maggot, HM）含有多种活性肽,已被证实有降低胆固醇,提高机体免疫能力,降血压等作用。从上个世纪80年代至今,家蝇抗菌肽、甲壳素等生物活性物质的研究一直是生命科学研究领域的热点之一。我们的前期结果显示,家蝇蛆粉能够有效降低高脂血症SD大鼠的血脂水平,并对SD大鼠动脉粥样硬化也有一定的预防作用。为进一步探讨家蝇蛆粉的抗动脉粥样硬化作用,本实验以国际公认的动脉粥样硬化模型——ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠为研究对象,从降血脂、抗氧化等方面来探讨家蝇蛆粉的抗动脉粥样硬化机制。研究方法:1 ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠分组和用药处理:繁殖鉴定ApoE-/-小鼠,随机分组,分为模型对照组、家蝇蛆粉处理（8g/kg/day）组、辛伐他汀处理（50mg/kg/day）组;ApoE-/-小鼠具有C57BL/6J小鼠遗传背景,故设一组C57BL/6J小鼠以做正常空白对照。为探讨家蝇蛆粉的抗氧化机制,以临床常用抗氧化类治疗动脉粥样硬化药物普罗布考（30mg/kg/day）设一处理组以做阳性参照。各组小鼠予灌胃用药处理,模型对照组和空白对照组则予灌胃生理盐水处理。2家蝇蛆粉对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的预防及治疗效果探讨:每组小鼠用药处理8周后,以辛伐他汀处理组做阳性参照,分别检测其主动脉和腹主动脉油红O染色斑块百分比,心脏三尖瓣部位病理切片油红-O染色斑块面积,主动脉横切面病理切片Elastin Van Gieson（EVG）染色观察弹性纤维增生情况等,并对数据进行统计分析。3家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的降血脂机制探讨:每14天检测各组ApoE-/-小鼠的胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平,以辛伐他汀处理组做阳性参照,观察家蝇蛆粉的降血脂效果。同时测定小鼠胆汁流量和胆汁酸含量,检测HMG-CoA还原酶活性,以探讨家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的降血脂机制。4家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的抗氧化机制探讨:每14天检测各组ApoE-/-小鼠的高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）水平,以普罗布考处理组做阳性参照,观察家蝇蛆粉的抗氧化效果。同时于用药8周后检测小鼠血丙二醛（malonyldialdehyde,MDA）和氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）水平,并检测各组小鼠心脏三尖瓣粥样斑块中巨噬细胞特异表达蛋白MAC-3,了解巨噬细胞分布情况,以探讨家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的抗氧化机制及其与巨噬细胞迁移的相关性。实验结果:1.家蝇蛆粉对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的预防及治疗效果探讨:预防试验中,模型对照组和家蝇蛆粉预防组间的主动脉和腹主动脉部位动脉粥样硬化斑块面积百分比平均值存在非常显著差异（21.34%,13.58%,P<0.01）,两组间的心脏三尖瓣部位动脉粥样硬化斑块面积平均值同样存在非常显著差异（216272.27±28649μm2,131998.17±24165μm2,P<0.01）。而在治疗试验中,模型对照组和家蝇蛆粉治疗组间的主动脉和腹主动脉部位动脉粥样硬化斑块面积百分比平均值也存在非常显著差异（22.53%,15.91%,P<0.01）,两组间的心脏三尖瓣部位动脉粥样硬化斑块面积平均值同样存在显著差异（ 283423.83±34649μm2 ,236272.2347±36749μm2,P<0.05）。另外,对ApoE-/-小鼠主动脉横切面组织病理切片进行Elastin Van Gieson（EVG）弹性纤维特异染色结果显示,预防和治疗实验均同时使ApoE-/-小鼠主动脉弹性纤维增生情况缓解明显。2.家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的降血脂机制探讨:家蝇蛆粉处理组的TC水平远低于模型对照组,存在非常显著差异（P<0.01）,接近于辛伐他汀处理组;家蝇蛆粉处理组的TG水平相对于模型对照组也有降低,存在显著差异（P<0.05）。家蝇蛆粉处理组的胆汁流量增加且优于辛伐他汀处理组,并具有显著差异（86.15±16.11μl/h,121.02±15.76μl/h,P<0.05）,总胆汁酸（TBA）排泄量增加并具有显著差异（3.34±0.68μmol/h,4.79±1.39μmol/h,P<0.05）,HMG-CoA还原酶的活性降低并具有显著差异（P<0.05）。3.家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的抗氧化机制探讨:与模型对照组对比,家蝇蛆粉处理组HDL水平逐步提高,并在14周左右维持在较高的一个水平,存在非常显著差异（P<0.01）;家蝇蛆粉处理组的LDL水平在用药后得到有效控制,维持在一个较低的水平。家蝇蛆粉处理组的肝脏匀浆MDA和Ox-LDL水平与模型对照组相比存在非常显著差异（P<0.01;P<0.005）,其中Ox-LDL的下降幅度甚至高于普罗布考组。免疫组化结果显示家蝇蛆粉处理组粥样斑块中巨噬细胞数量明显减少。结论:1.家蝇蛆粉对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化有一定的缓解作用。其主要表现为家蝇蛆粉分别减少了ApoE-/-小鼠主动脉和腹主动脉部位以及心脏三尖瓣部位动脉粥样硬化斑块的面积;同时,使ApoE-/-小鼠主动脉弹性纤维增生的情况得到明显缓解。2.家蝇蛆粉的抗动脉粥样硬化作用涉及血脂的下降,其机制和胆汁流量增加、总胆汁酸（TBA）合成促进、机体胆固醇排出加速及胆固醇合成系统限速酶（HMC-CoA）的抑制相关。3.家蝇蛆粉的抗动脉粥样硬化作用涉及抗氧化效应,其机制和HDL水平升高以保护LDL不被氧化为Ox-LDL,降低机体的氧化压力以减少Ox-LDL生成,巨噬细胞向血管壁迁移受抑制以减缓泡沫化脂质斑块形成等相关。

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 第一章 前言
  • 1.1 动脉粥样硬化形成的病理基础
  • 1.2 动脉粥样硬化与血脂水平
  • 1.3 动脉粥样硬化与机体氧化压力
  • 1.4 动脉粥样硬化主要治疗药物
  • 1.5 家蝇蝇蛆资源的开发
  • 1.6 动脉粥样硬化动物模型
  • 第二章 家蝇蛆粉预防动脉粥样硬化的作用研究
  • 2.1 前言
  • 2.2 实验材料
  • 2.2.1 家蝇蛆粉及其制备
  • 2.2.2 高脂饲料配制
  • 2.2.3 实验动物
  • 2.2.4 主要试剂
  • 2.2.5 主要仪器设备
  • 2.3 实验方法
  • 2.3.1 转基因动物（APOE-/-小鼠）建系
  • 2.3.2 小鼠分组及处理
  • 2.3.3 小鼠解剖及取材
  • 2.3.4 小鼠主动脉和腹主动脉油红-O 染色
  • 2.3.5 小鼠心脏三尖瓣部位冰冻组织病理切片油红-O 染色
  • 2.3.6 小鼠主动脉横切面病理组织切片EVG 染色
  • 2.3.7 统计学分析
  • 2.4 实验结果
  • 2.4.1 转基因动物（APOE-/-小鼠）鉴定情况
  • 2.4.2 各组小鼠主动脉和腹主动脉部位斑块情况
  • 2.4.3 各组小鼠心脏三尖瓣部位冰冻组织病理切片显示斑块情况
  • 2.4.4 各组小鼠主动脉横切面病理组织切片显示弹性纤维增生情况
  • 2.5 讨论
  • 第三章 家蝇蛆粉治疗动脉粥样硬化的作用研究
  • 3.1 前言
  • 3.2 实验材料
  • 3.2.1 家蝇蛆粉及其制备
  • 3.2.2 高脂饲料配制
  • 3.2.3 实验动物
  • 3.2.4 主要试剂
  • 3.2.5 主要仪器设备
  • 3.3 实验方法
  • 3.3.1 小鼠分组及处理
  • 3.3.2 小鼠解剖及取材
  • 3.3.3 小鼠主动脉和腹主动脉油红-O 染色
  • 3.3.4 小鼠心脏三尖瓣部位冰冻组织病理切片油红-O 染色
  • 3.3.5 小鼠主动脉横切面组织病理切片EVG 染色
  • 3.3.6 统计学分析
  • 3.4 实验结果
  • 3.4.1 各组小鼠主动脉和腹主动脉部位斑块情况
  • 3.4.2 各组小鼠心脏三尖瓣部位病理切片显示斑块情况
  • 3.4.3 各组小鼠主动脉横切面病理切片显示弹性纤维增生情况
  • 3.5 讨论
  • 第四章 家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化作用的降血脂机制探讨
  • 4.1 前言
  • 4.2 实验材料
  • 4.2.1 家蝇蛆粉和辛伐他汀溶液的配制
  • 4.2.2 实验动物
  • 4.2.3 主要试剂
  • 4.2.4 主要仪器设备
  • 4.3 实验方法
  • 4.3.1 小鼠分组及处理
  • 4.3.2 测定血清总胆固醇（TC）
  • 4.3.3 测定血清甘油三酯（TG）
  • 4.3.4 测定血清低密度脂蛋白（LDL）
  • 4.3.5 测定胆汁流量
  • 4.3.6 测定胆汁中总胆汁酸（TBA）排泄量
  • 4.3.7 ELISA 法测定HMG-COA 还原酶活性水平
  • 4.3.8 统计学分析
  • 4.4 实验结果
  • 4.4.1 各组小鼠血清中总胆固醇（TC）水平
  • 4.4.2 各组小鼠血清中甘油三酯（TG）水平
  • 4.4.3 各组小鼠血清中低密度脂蛋白（LDL）水平
  • 4.4.4 各组小鼠胆汁流量
  • 4.4.5 各组小鼠总胆汁酸（TBA）排泄量
  • 4.4.6 各组小鼠HMG-COA 还原酶活性水平
  • 4.5 讨论
  • 第五章 家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化作用的抗氧化机制探讨
  • 5.1 前言
  • 5.2 实验材料
  • 5.2.1 家蝇蛆粉和普罗布考溶液的配制
  • 5.2.2 实验动物
  • 5.2.3 主要试剂
  • 5.2.4 主要仪器
  • 5.3 实验方法
  • 5.3.1 小鼠分组及给药处理
  • 5.3.2 测定高密度载脂蛋白胆固醇（HDL）浓度
  • 5.3.3 测定低密度载脂蛋白胆固醇（LDL）浓度
  • 5.3.4 测定丙二醛（MDA）浓度
  • 5.3.5 ELISA 法测定小鼠氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）浓度
  • 5.3.6 MAC-3 特异抗体免疫组化
  • 5.3.7 统计学分析
  • 5.3.8 MAC-3抗体免疫组化检测
  • 5.3.9 统计学分析
  • 5.4 实验结果
  • 5.4.1 各组小鼠的血清高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）浓度情况
  • 5.4.2 各组小鼠的丙二醛（MDA）浓度情况
  • 5.4.3 各组小鼠氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）浓度情况
  • 5.4.4 MAC-3 特异抗体免疫组化结果
  • 5.5 讨论
  • 参考文献
  • 全文总结
  • 附录Ⅰ：缩写词中英文对照
  • 附录Ⅱ:在读期间发表论文与奖励
  • 致谢

    • 相关论文文献

    • [1].蝇蛆粉治疗腹泻小鼠的研究[J]. 石河子大学学报(自然科学版) 2019(06)
    • [2].蝇蛆蛋白在畜牧生产中应用的研究进展[J]. 饲料工业 2020(05)
    • [3].牦牛皮蝇蛆低残留防治研究[J]. 畜牧兽医科学(电子版) 2020(07)
    • [4].基于蝇蛆养殖技术的畜禽粪便处理模式[J]. 农业工程 2020(05)
    • [5].蝇蛆养殖过程中的常见问题分析及对策研究[J]. 湖北畜牧兽医 2016(12)
    • [6].对牦牛皮蝇蛆低残留防治技术的探讨[J]. 当代畜牧 2016(32)
    • [7].蝇蛆养殖在农业中的应用初探[J]. 湖北畜牧兽医 2015(02)
    • [8].慢慢走,欣赏啊![J]. 读者欣赏 2012(11)
    • [9].养殖蝇蛆生态又高效[J]. 农家致富 2013(03)
    • [10].蝇蛆养殖培训出成果[J]. 农家致富 2013(03)
    • [11].收购蝇蛆[J]. 农家致富 2009(10)
    • [12].蝇蛆养殖系列讲座之二 蛆的饲养与管理[J]. 农家致富 2009(05)
    • [13].蝇蛆养殖系列讲座之四 蝇蛆的利用[J]. 农家致富 2009(07)
    • [14].蝇蛆粉对腹泻小鼠肠道大肠杆菌数量及血清抗氧化酶和消化相关酶活性的影响[J]. 动物营养学报 2020(02)
    • [15].饲料中不同成分配比对蝇蛆生长发育的影响[J]. 农村科技 2018(12)
    • [16].畜禽粪便养殖蝇蛆生物化设备的研究[J]. 农业开发与装备 2019(04)
    • [17].生产蝇蛆饲喂蛋鸡方法[J]. 农村百事通 2015(24)
    • [18].蝇蛆肽的发酵法制备及其对果蝇的延寿作用[J]. 河北大学学报(自然科学版) 2015(06)
    • [19].蝇蛆疗法在创面修复治疗中的应用进展[J]. 感染、炎症、修复 2010(01)
    • [20].蝇蛆是理想的“垃圾清道夫”[J]. 农家书屋 2016(09)
    • [21].蝇蛆养殖——生态农业奇招[J]. 农家致富 2012(03)
    • [22].蝇蛆饵料的选择[J]. 农业知识 2010(12)
    • [23].蝇蛆喂鸡高效技法[J]. 乡村科技 2013(11)
    • [24].蝇蛆在水产养殖中的应用研究进展[J]. 湖北农业科学 2012(07)
    • [25].蝇蛆蛋白营养成分及其饲用价值研究进展[J]. 南方农业学报 2012(05)
    • [26].培育蝇蛆喂鸡技法[J]. 农村新技术 2011(19)
    • [27].蝇蛆喂鸡高效技法[J]. 家禽科学 2010(04)
    • [28].繁育蝇蛆喂鸡有技巧[J]. 养禽与禽病防治 2010(09)
    • [29].蝇蛆养殖常见问题及对策[J]. 现代农业科技 2010(21)
    • [30].浅谈蝇蛆养殖的可行性[J]. 中国畜禽种业 2010(12)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  

    家蝇蛆粉对ApoE-/-小鼠抗动脉粥样硬化作用及其机制的探讨
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5