天麻镇眩颗粒的毒理学实验研究

论文摘要

天麻镇眩颗粒是南方医科大学著名名老中医陈宝田教授经过数十年临床经验总结出的经验方,它由苓桂术甘汤等组成,在临床上用于治疗中医之“眩晕”,即现代医学之梅尼埃病。梅尼埃病是以膜迷路积水为基本病理改变的特发性内耳疾病。临床以发作性眩晕、耳聋和耳鸣为临床特征,首次发病年龄多在30～50岁居多。发病原因至今尚无定论,许多学者认为可能与耳蜗微循环障碍、内淋巴液生成及吸收平衡失调、免疫反应与自身免疫异常、膜迷路破裂以及植物神经功能紊乱等有关。由于原因仍不清楚,因此临床治疗常常是困难的,迄今很难治愈。陈宝田教授用天麻镇眩颗粒治疗此病屡获良效。陈宝田教授在治疗梅尼埃病积累了丰富的经验,而目前中药市场上治疗梅尼埃病的中成药甚少,因此一种安全有效的治疗药物正是梅尼埃病患者和市场所急需的。一旦天麻镇眩颗粒开发成一种新药,将会给梅尼埃病患者带来福音,这正是我们选题的目所在。在开发成新药前对其有效性及安全性做出初步评价必不可少。其有效性已由崔桂梅博士完成,本实验主要负责天麻镇眩颗粒急性毒性与慢性毒性部分。第一部分天麻镇眩颗粒的急性毒性实验目的:通过观察对实验动物一次给药后所产生的毒性症状及其程度,出现和消失的时间,死亡的发生率,并计算出其最大给药量,从而推测天麻镇眩颗粒对人的急性毒性的强弱。方法:根据预试验结果,未测出天麻镇眩颗粒LD50,故只做最大给药量试验。40只小鼠随机分成2组,即天麻镇眩颗粒组和空白对照组,每组20只,雌雄各半。禁食,不禁水12h后,天麻镇眩颗粒组以87.5%浓度,0.8ml/20g体积（最大允许容量、最大可灌浓度）经胃一次性灌服天麻镇眩颗粒溶液,剂量为35g/kg。空白对照组给予等容积负离子水。给药当日,严密观察小鼠外观、行为活动、呼吸、分泌物、排泄物、死亡等情况,常规饲养并观察7天,称取体重,记录死亡及毒副反应症状。实验结束时,将全部动物处死、解剖,肉眼检查各主要脏器组织病变情况,计算最大耐受量。结果:小鼠外观、行为活动、呼吸、分泌物、排泄物未见异常,未有小鼠死亡。给药前给药组与对照组体重（g）分别为26.05±3.22,24.50±2.76;给药后第8天给药组与对照组体重（g）分别为30.45±4.40,27.60±3.03。组间比较给药前后体重增长无显著性差异。肉眼尸检心、肝、脾、肺、肾、胃肠等主要脏器组织未见明显异常。测得最大耐受量≥35g/kg,此剂量是临床成人（以60kg计算）每日口服剂量0.05g/kg的700倍以上。第二部分天麻镇眩颗粒的长期毒性实验目的:观察连续重复给予天麻镇眩颗粒对大鼠所产生的毒性反应,发现该药可能引起的不良反应,提示临床实验中需重点监测的安全指标,为临床毒性反应解救措施提供参考信息。方法:Wistar大鼠80只,随机分成天麻镇眩颗粒高、中、低剂量组及对照组4组,每组雌雄各10只,实验前适应性观察1周。受试药物按60kg成人每天服用3g等效换算,高、中、低剂量组分别等效于成年人用量的54、27、13.5倍,即分别为2.7g/kg、1.35g/kg、0.68g/kg,给药体积均为1ml/100g。连续给药12周,每日上午给药,每周称量记录体重一次。实验期间观察大鼠外观、行为、饮食、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应等。最后一次给药后24小时每组处死10只大鼠（雌雄各半）检测血液学指标,血液生化学指标并进行系统尸解,秤取主要脏器重量并计算脏器系数,肉眼观察病理变化,并将主要脏器组织石蜡包埋、切片、光镜下观察病理变化。每组留下10只大鼠（雌雄各半）继续观察2周,再处死检查以上各指标。结果:1天麻镇眩颗粒对大鼠一般状况的影响给药期间及恢复期间,高、中、低剂量三个给药组及空白对照组动物均无一死亡,各组大鼠的行为、自主活动、摄食、饮水、粪便、尿液均未见异常,眼、耳、鼻、口未见异常分泌物。高剂量组2只雌性大鼠用药第5周头颈背部、眼眶周围及前肢出现脱毛,毛色光亮,脱毛处皮肤颜色、质地未见异常,2周后脱毛现象恢复。其余组毛发未见异常。2天麻镇眩颗粒对大鼠体重的影响给药期各组动物体重一直呈增长趋势,不管是雄性（F=3.601,P＜0.05）还是雌性（F=1279.107,P＜0.001）均是如此。但给药期,各组雄性大鼠体重增长速度不一致（F=1791.081,P＜0.001）,高、中剂量组动物体重增长随用药时间的延长相对缓慢,成时间效应关系,低剂量组动物体重增长未见明显时间效应关系。给药剂量与时间之间存在交互效应（F=2.477,P＜0.001）。给药期各组雌性动物体重之间差异无统计学意义（F=0.727,P=0.543）,从各时间点看均是如此。动物组别与时间之间不存在交互效应（F=1.540,P=0.163）。恢复期各组雄性大鼠体重均逐周增长（F=5.864,P＜0.05）,各组动物体重增长速度一致（F=1.759,P=0.195）。雄性大鼠组别与时间之间不存在交互效应（F=0.638,P=0.062）。恢复期雌性大鼠体重除中剂量组（t=0.619,P=0.420）外其余各组动物体重均逐周增长。各组雌性大鼠体重存在差异（F=4.419,P=0.019）,第14周各组动物体重差异有统计学意义（F=5.511,P=0.007）,多重比较结果显示,高剂量组、中剂量组与对照组均低于低剂量组。雌性大鼠组别与时间之间不存在交互效应（F=2.463,P=0.100）。3天麻镇眩颗粒对大鼠血液学指标的影响。给药期各组PLT差异有统计学意义（F=2.962,P=0.045）,各剂量组与对照组比较均有不同程度的升高,低剂量组明显高于对照组;各组WBC差异有统计学意义（F=3.366,P=0.029）,高、中剂量组,对照组明显低于低剂量组;各组LYM差异有统计学意义（F=4.400,P=0.010）,高、中剂量组、对照组明显低于低剂量组;各组MID差异有统计学意义（F=3.065,P=0.041）,高、中、低剂量组明显高于对照组;各组PT差异有统计学意义（F=3.589,P=0.037）,但组间两两比较差异均无统计学意义。恢复期各血液学指标各组之间差异均没有统计学意义,各血液学指标均在同一水平上。4天麻镇眩颗粒对大鼠血液生化学指标的影响给药期各组BUN差异有统计学意义（F=3.611,P=0.034）,中剂量组明显低于对照组,未见明显剂量效应关系;其余各血液生化学指标各组之间差异均没有统计学意义,各血液生化学指标均在同一水平上。恢复期各组TG差异有统计学意义（F=3.675,P=0.033）,但组间两两比较差异均无统计学意义;其余各血液生化学指标各组之间差异均没有统计学意义,各血液生化学指标均在同一水平上。5天麻镇眩颗粒对大鼠脏器重量及脏器系数的影响给药期各组脾脏系数与脾脏湿重差异均有统计学意义（F值分别为2.57、2.900,P值分别为0.046、0.049）.高剂量组与对照组均低于中剂量组;各组之间肺脏湿重差异有统计学意义（F=3.281,P=0.032）,高剂量组、低剂量组、对照组均低于中剂量组。恢复期各组胸腺系数、胸腺湿重差异均有统计学意义（F值分别为3.689、4.177,P值分别为0.021、0.012）,中剂量组高于对照组;各组之间睾丸湿重有统计学差异（P=3.485,F=0.041）,高、低剂量组均低于中剂量组;各组之间肝脏系数差异有统计学意义（P=3.960,F=0.024）,低剂量组低于对照组。6病理组织学镜检结果给药期高剂量组（2只/10只）、对照组（2只/10只）动物肝细胞出现脂肪变、嗜酸性变,肝细胞肿胀一种或者2种病理变化并存;每组均有1～2只动物出现间质性肺炎或慢性支气管炎变化。恢复期高剂量组（2只/10只）、对照组（2只/10只）组动物肝细胞出现嗜酸性变、肝细胞肿胀,一种或者2种病理变化并存;每组均有1～2只动物出现慢性支气管炎变化。结论1、天麻镇眩颗粒急性毒性实验小鼠最大耐受量≥35g/kg,此剂量是临床成人（以60kg计算）每日口服剂量0.05g/kg的700倍。2、天麻镇眩颗粒对雄、雌性大鼠的体重增长均有促进作用。3、天麻镇眩颗粒对大鼠血液学指标的影响具有可逆性且无延迟反应。4、天麻镇眩颗粒对大鼠血液生化学指标无影响。5、天麻镇眩颗粒对大鼠脏器湿重及脏器系数无影响。6、天麻镇眩颗粒对大鼠脏器病理组织学无影响。7、天麻镇眩颗粒无毒副作用,连续服用安全。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 天麻镇眩颗粒的急性毒性实验
• 1 实验目的
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 4 实验结果及讨论
• 第二部分 天麻镇眩颗粒的慢性毒性实验研究
• 1 实验目的
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 4 结果
• 5 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间成果
• 致谢