论文摘要
鸡的胚胎性疾病是指鸡胚在发育过程中,由于某些异常的理化和生物因素的作用,出现发育偏差,以致发生病变、畸形和死亡的现象。鸡胚胎病根据其发病机理和发病原因的不同可将其分为遗传性胚胎病、营养性胚胎病、传染性胚胎病以及孵化条件不当引起的胚胎病,其中已传染性胚胎病最为常见,给种鸡场带来巨大的经济损失。因此本实验对造成仔鸡胚胎病的发病原因及流行病学进行系统的研究,为该病的预防和控制提供理论基础。本试验共分为3部分:试验一、大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌多重PCR检测方法的建立根据GenBank中已发表的大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌保守基因序列设计合成3对特异性引物,建立了大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌多重PCR检测方法,并进行灵敏性试验、特异性试验。特异性试验结果表明该研究建立的大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌多重PCR检测方法只能扩增出大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌相对应的特异性目的片段,链球菌、副鸡嗜血杆菌等均为阴性;敏感性试验结果表明建立的该方法能同时检测出10ng的大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌,大肠杆菌和沙门氏菌的最低检出限量为100pg。进而说明该研究建立的大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌多重PCR检测方法敏感性高、特异性强,适用于大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌的流行病学调查研究。实验二、REV、H9N2、CIAV和VAV多重PCR检测方法的建立该研究根据REV、VAV和H9N2亚型禽流感病已发表的基因序列设计合成4对特异性引物,建立了多重PCR检测方法。特异性试验结果表明建立的该方法只能扩增出相应病毒,其它病毒扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明建立的该多重PCR检测方法最低能同时扩增出10-5稀释的病毒核酸。以上研究结果表明该研究建立的多重PCR检测方法是一种灵敏度高、特异性强、准确、快速的检测方法,为网状内皮组织增生征病毒、传染性贫血病毒、呼肠孤病毒和H9N2亚型流感病毒流行病学调查和诊断提供一种良好的方法。实验三、山东省某规模化种鸡场仔鸡肧死亡原因的流行病学调查用建立的多重PCR方法对该种鸡场仔鸡胚胎病发病原因进行检测,结果表明死胚中大肠杆菌、沙门氏菌、支原体的检出率分别为25%、4%、2.5%,葡萄球菌的检出率为0;病毒检测结果表明只从产蛋种鸡中检测到H9N2亚型流感病毒,传染性贫血病毒、网状内皮组织增生征病毒和呼肠孤病毒均为阴性。