茶树内生真菌的分离、相互作用关系及菌株抗菌活性成分的初步研究

论文摘要

在对茶树内生真菌进行系统分离、纯化的基础上，在以下三方面对茶树内生真菌做了初步研究：1、茶树品种、叶片生育期和茶叶化学成分对茶树内生真菌的影响；2、茶树内生真菌之间的相互关系及拮抗性茶树内生菌的筛选；3、内生细菌抗菌活性组分的纯化。通过以上研究，得出一些有意义的结果，主要包括：(1)茶树品种黄旦的内生真菌分离频率达100％，而福云六号只有7.5％，表明茶树品种不同或遗传背景不同，其叶片中内生真菌的发生存在明显差异；(2)叶片中内生真菌的数量与叶片龄期呈正相关，叶片龄期影响茶树内生真菌的种群结构；(3)不同龄期叶片水浸提液对3种茶树上的主要内生真菌的生长产生不同的影响，表明茶树叶片的化学成份是影响内生真菌分布的重要因素之一；(4)通过对峙实验以及发酵液抗菌实验表明：茶树内生真菌之间可以体现共栖、拮抗和寄生等3种不同类型的相互作用关系；(5)从根部分离获得的一株内生青霉菌对黑曲霉表现明显的拮抗作用，它的发酵液对7种检测菌都有拮抗作用，对茶叶的病原菌也有较强的抑制作用；(6)分离获得一株抗菌能力较强的内生细菌，通过硅胶柱层析和HPLC对内生细菌发酵液进行分离纯化，最后得到一种有生物活性的纯物质。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中文文摘
• 第1章 绪论
• 1.1 前言
• 1.2 内生真菌的物种多样性
• 1.3 内生真菌增强宿主植物生态适应性的表现
• 1.3.1 内生真菌感染增强植物的生态竞争能力
• 1.3.2 内生真菌对宿主抗虫性的影响
• 1.3.3 内生真菌与植物的抗病性
• 1.3.4 内生真菌与植物的抗旱性
• 1.3.5 内生真菌与植物的抗高温性
• 1.3.6 内生真菌与植物对重金属的抗性
• 1.4 内生真菌提高宿主抗逆性的可能机制
• 1.4.1 拮抗性次生代谢产物
• 1.4.2 诱导抗性
• 1.5 前景
• 1.6 本研究的目的及主要内容
• 第2章 茶树品种、叶片生育期和茶叶化学成份对内生真菌的影响
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.1.1 茶叶来源
• 2.2.1.2 培养基
• 2.2.1.3 主要仪器设备
• 2.2.2 方法
• 2.2.2.1 内生真菌分离方法
• 2.2.2.2 不同品种茶树叶片中内生真菌的分离及分离率的计算
• 2.2.2.3 不同品种茶叶浸提液对内生真菌生长的影响
• 2.2.2.4 不同生育期茶树叶片中内生真菌的分离
• 2.2.2.5 不同生育期茶树叶片中茶多酚含量的测定
• 2.2.2.6 茶多酚对茶树主要内生真菌生长的影响
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 茶树品种影响内生真菌的分布
• 2.3.2 茶叶生育期影响内生真菌的分布
• 2.3.3 茶叶浸提液对茶树主要内生真菌生长的影响
• 2.3.4 茶叶多酚含量影响内生真菌的分布
• 2.4 讨论
• 第3章 茶树内生真菌之间相互关系及有抗菌作用菌株的筛选
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 材料
• 3.2.1.1 茶树样本
• 3.2.1.2 培养基
• （1） 固体培养基
• （2） 液体培养基
• 3.2.1.3 检测菌
• 3.2.1.4 检测菌培养基
• 3.2.1.5 茶树病原菌
• 3.2.1.6 主要仪器
• 3.2.2 方法
• 3.2.2.1 茶树茎和根部内生真菌的分离
• 3.2.2.2 叶部内生真菌的分离
• 3.2.2.3 茶树内生真菌之间的相互作用
• 3.2.2.4 拮抗性内生菌的初步鉴定
• 3.2.2.5 内生青霉菌发酵液的制备及粗提物的获得
• 3.2.2.6 内生青霉菌发酵液的抗菌谱
• 3.2.2.7 青霉菌对茶叶病原菌的拮抗作用测定
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 茶树内生真菌的分离
• 3.3.2 部分茶树内生真菌的初步鉴定
• 3.3.2.1 内生木霉的初步鉴定
• 3.3.2.2 内生青霉的初步鉴定
• 3.3.3 茶树内生真菌之间的相互作用关系
• 3.3.3.1 内生木霉菌的拮抗作用
• 3.3.3.2 内生细菌的抑菌作用
• 3.3.3 3 内生拟盘多毛孢的抑菌作用
• 3.3.3.4 内生青霉发酵液的抑菌作用
• 3.4 讨论
• 3.4.1 内生真菌在茶树体内的普遍存在
• 3.4.2 茶树内生真菌之间的微生态学关系
• 3.4.3 内生菌的抗菌机制
• 3.4.4 茶树内生菌的应用潜力
• 第4章 茶树内生细菌抗菌活性组分的分离纯化
• 4.1 前言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 材料
• 4.2.1.1 抗菌活性测定培养基
• 4.2.1.2 玉米粉蛋白胨液体培养基
• 4.2.1.3 测定指示菌
• 4.2.1.4 仪器设备及试剂
• 4.2.2 方法
• 4.2.2.1 内生细菌的初步鉴定
• 4.2.2.2 内生细菌发酵液的制备及抗菌作用
• 4.2.2.3 上柱样品的制备
• 4.2.2.4 展开剂的选择
• 4.2.2.5 硅胶柱层析分离
• 4.2.2.6 洗脱液检测
• 4.2.2.7 组分IV的 HPLC分析
• 4.3 结果
• 4.3.1 内生细菌的初步鉴定
• 4.3.2 内生细菌的抗菌作用
• 4.3.2.1 内生细菌的抗真菌作用
• 4.3.2.2 内生细菌的抗细菌作用
• 4.3.2.3 展开剂的选择
• 4.3.2.4 硅胶柱层析结果
• 4.3.2.5 TLC检测及生物活性检测结果
• 4.3.2.6 HPLC分离及生物活性追踪实验
• 4.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果
• 致谢
• 个人简历Curriculm Vita