肝癌干细胞筛选及Oct4、ABCG2对其耐药性影响的初步研究

论文摘要

目的：通过富集培养肝癌干细胞，初步探讨八聚体结合转录因子4（Oct4）及ATP结合盒转运蛋白（ABCG2）在肝癌细胞和肝癌干细胞中的表达及对耐药性的影响。方法：采用流式细胞仪从肝癌细胞（检测HepG2、Hep3B两种细胞系）中分选CD90及CD133表达阳性的肝癌干细胞，无血清培养液悬浮培养肝癌干细胞球。实验分组为肝癌干细胞实验组及肝癌细胞对照组。利用单细胞克隆形成实验来检测分析实验细胞的增殖的能力。在相同条件及浓度下给予肝癌细胞组及肝癌干细胞组阿霉素处理，MTT法检测阿霉素处理后实验组及对照组细胞的存活率。RT-PCR、real-time PCR及western blot检测实验组及对照组细胞中CD90，CD133，Oct4及ABCG2mRNA及蛋白水平的相应表达。结果：单细胞克隆形成实验显示培养第14天细胞克隆形成率：Hep3B细胞组克隆形成率为8/27（30%）、Hep3B干细胞组为12/23（52%）（p<0.05）；HepG2细胞组为7/38（18%）、HepG2干细胞组克隆形成率为9/27（35%）（p<0.05），说明肝癌干细胞中单个细胞的增殖能力强于肝癌细胞的增殖能力。同等条件下用阿霉素分别处理肝癌细胞及肝癌干细胞后，MTT法测定结果显示肝癌干细胞组细胞活性明显高于肝癌细胞组，48h后各组处理后的细胞活性：HepG2细胞组细胞活性为（38.17±6.92）%、HepG2干细胞组为（69.88±5.43）%，p<0.05；Hep3B细胞组细胞活性为（50.16±4.89）%，Hep3B干细胞组为（78.53±7.86）%，p<0.05。RT-PCR及real-time PCR结果显示肝癌干细胞组中CD90、CD133、Oct4及ABCG2基因mRNA表达水平较亲代肝癌细胞组显著上调（p<0.05）。Western blot结果显示肝癌干细胞组Oct4及ABCG2蛋白水平显著上调，与肝癌细胞组相比其Oct4及ABCG2蛋白表达水平的差异有显著性（p<0.05）。结论： Oct4及ABCG2高表达于CD90+CD133+肝癌干细胞，并且Oct4及ABCG2基因在肝癌干细胞中的高表达有可能与肝癌的耐药性密切相关。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述：肝癌干细胞研究现状及展望
• 参考文献
• 致谢
• 硕士在读期间发表的论文