论文摘要
膀胱癌是泌尿外科最常见的肿瘤,具有生长缓慢、多中心性、易复发等特点,占全身恶性肿瘤的3%,其中来源于尿路上皮的肿瘤占95%以上,直接威胁患者的生命。膀胱癌的治疗以手术为主,但术后容易复发,且肿瘤的恶性程度、浸润能力随着复发次数的增加往往也随之增强。近年来,在小分子RNA中新发现了一类与调节基因表达密切相关的小分子非编码单链RNA,称其为微RNA,已有研究表明miRNAs与肿瘤的发生密切相关[1]。MiRNAs是新发现的一类非编码小分子RNA,长约19-25个核苷酸,通常在转录后水平调控基因表达。成熟miRNAs通过与靶基因mRNA的3’UTR完全或不完全互补配对,降解靶基因mRNA或阻遏其转录后翻译[2]。近年来研究表明miRNAs可能是一类进化上相对保守的RNA分子,在细胞的分化、增殖和凋亡,个体发育,机体代谢以及病毒感染中都具有重要的作用,miRNAs表达丰度和方式的多样性,使其可能作为蛋白质编码mRNA的强有力的调节子[3]。MiRNAs以碱基互补的形式识别靶分子并与之结合,使其表达上升或下降,在肿瘤发生发展过程中可能发挥癌基因或抑癌基因的作用[4]。最新研究表明,肿瘤细胞与正常组织来源细胞间miRNAs表达谱具有明显的差异,且多数miRNAs基因都位于肿瘤形成相关脆性基因位点,这就提示miRNAs在肿瘤的形成中可能扮演重要的角色,研究与肿瘤相关的miRNAs可能为肿瘤的预防和治疗开辟新的方向[5-6].经过反复论证与实验研究,结合当前生命科学与医学的研究现状,在膀胱癌的基因研究方面存在很多空白及误区。本此实验的课题旨在对miRNAs在膀胱移行上皮癌与正常膀胱上皮组织的表达谱芯片进行分析,就差异表达比较明显的几种miRNAs在膀胱癌中的表达进行进一步的研究,并探讨膀胱癌中各种miRNAs的表达在膀胱癌发生发展中可能存在的作用机理及临床意义,为膀胱癌在基因水平的诊治提供理论基础与实验依据。首先,在对各种miRNAs的在膀胱癌中的表达的鉴定及临床意义方面分析,我们对miRNAs的的表达谱芯片进行分析,发现多个miRNAs在膀胱移行上皮癌中却呈高低表达的特点[7]。其次,在探讨膀胱癌中miRNAs功能学方面,我们将miRNAs通过RT-PCR,技术观察了miRNAs的变化。结果显示, miRNAs在膀胱癌组织中的表达水平明显偏高,而对照组中均无明显变化。同时采用微点阵杂交法分析检测手术标本中肿瘤组织及其癌旁正常组织的miRNAs的表达情况。综上所述,我们运用RT-PCR技术证实了miRNAs在膀胱癌中较正常膀胱上皮中表达升高,且miRNAs可能通过作用于潜在靶基因抑制其蛋白的翻译并阻止其传导通路的活化,从而抑制肿瘤形成。这些研究成果不仅为膀胱癌的发病机理提供了新的研究途径,而且为临床上膀胱癌的诊断以及miRNAs作为膀胱癌基因治疗的新策略奠定了坚实的基础。目的:微小RNA是一类参与基因转录后水平调控的非编码小分子RNA,近年来,研究发现microRNAs的表达与多种肿瘤密切相关。为了研究microRNAs在人类膀胱肿瘤组织中的表达及其作用,我们分析了45例膀胱肿瘤中各种microRNAs分子的表达。方法:取安徽医科大学附属省立医院2009年手术切除的45例膀胱肿瘤组织标本及其肿瘤旁正常组织标本。通过RT-PCR和微阵点杂交法检测肿瘤组织及其癌旁正常组织的手术标本中microRNAs的表达情况,分析癌组织及其癌旁正常膀胱组织进行定性判断(癌和非癌)。结果:人类膀胱肿瘤组织与正常膀胱组织相比,miR-223, miR-221, miR-103-1, miR-185, miR-23b,miR-203, miR-17-5p, miR-23a和miR-205表达显著上调(P<0.005),miR-26b有中度下降趋势(P=0.085)。无论是良性肿瘤或恶性肿瘤,两者中,均有共同的miR-185上调。结论:miRNAs与膀胱肿瘤的发生发展有密切的联系,有可能成为一个有效的肿瘤标志物以进行膀胱肿瘤的早期预测和诊断。
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