论文摘要
目的研制一种能同时检测多种食物过敏原特异性IgE的检测条,并探讨其在过敏性疾病诊断中的应用价值,为临床提供一种高效实用的过敏原特异性IgE检测的新技术。方法1.制备蛋白、牛奶、小麦、花生、黄豆、腰果、蟹、虾等八种常见食物过敏原的提取液,测定提取液的蛋白质浓度并进行浓缩处理及SDS-PAGE分析。2.选用硝酸纤维素膜（NC膜）作为固相载体,对过敏原的包被条件和检测条件进行优化。选用患者阳性血清进行检测,正常人血清及胎牛血清作为阴性对照,选择阳性血清显色清晰且正常人血清及胎牛血清背景干净的组合条件作为最佳制备条件和检测条件。3.根据优化结果制备可同时检测八种过敏原的检测条,并对检测条的灵敏性、重复性和稳定性进行检测。4.将研制的检测条按照优化结果对210份患者血清和30份正常人血清进行检测,并与Allergyscreen过敏原检测系统的检测结果进行对比分析。结果以硝酸纤维素膜（NC膜）作为固相载体,八种食物过敏原除点样浓度有不同外,其它制备条件和检测条件均相同。八种过敏原的最佳点样浓度分别为:蛋白0.25mg/ml、牛奶1mg/ml、小麦1mg/ml、花生1mg/ml、黄豆1mg/ml、腰果1mg/ml、蟹0.25mg/ml、虾0.25mg/ml。检测条制备和检测的最佳条件与过程为:以NC膜为固相载体,按照每种过敏原的最佳点样浓度点样一次,室温下包被2小时,2%PVA室温下封闭1小时,待检血清1:10稀释,与检测条在摇床上室温下反应2小时,洗膜,加入浓度为2μg/ml的碱性磷酸酶（AP）标记的抗人IgE单克隆抗体,与检测条在摇床上室温下反应半小时,洗膜,最后加入BCIP/NBT底物,避光反应约十分钟,洗膜,完全干燥后判定检测的结果。检测条的灵敏性、重复性和稳定性好。与Allergyscreen过敏原检测系统的检测结果相比,两种方法对鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、螃蟹、虾等大多数过敏原的检出率无差异（P＞0.05）,对小麦和腰果的检出率有差异（P＜0.05）。两种方法的阳性结果符合率为63.6%,阴性结果符合率为94.6%,总体符合率为70.5%。用检测条检测30例正常人的血清,结果均为阴性。结论本研究建立的常见食物过敏原特异性IgE检测方法,具有血清用量少、周期短、可同时检测多种食物过敏原、操作简便、结果易于观察、价格低廉等优点。整个检测过程不到4小时,当天即可出结果,具有较强的临床检测应用价值,是一种很有发展前景的检测过敏性疾病的新方法。