论文摘要
【目的】建立硫酸软骨酶酶ABCI的分泌型真核表达质粒，并在胶质瘤细胞系中对其表达情况进行观察。【方法】通过PCR技术由宿主菌Proteus vulgaris全基因组DNA中扩增硫酸软骨素酶ABC I的全长cDNA，在PGEM-T easy载体中对其进行测序和扩增，后将其插入真核表达载体pcDNA3.1／V5／His，并在其5’端基底膜-40信号肽编码序列，构建成真核分泌型蛋白表达载体pcDNA3.1／CABCI／V5／His。用该质粒转染人胶质瘤细胞系TJ905，并利用SDS-PAGE考马斯亮蓝染色和免疫印渍检测培养物上清中的分泌型融合蛋白硫酸软骨素酶ABC I-V5的表达情况。【结果】琼脂糖凝胶电泳和酶切检测显示，经PCR扩增所得硫酸软骨素酶ABC I cDNA大小和酶切图谱与理论值相符。DNA测序显示，重组分泌型融合蛋白表达质粒pcDNA3.1／CABCI／V5／His的外源性插入片段的大小和序列完全正确。用pcDNA3.1／CABCI／V5／His重组质粒转染转染人胶质瘤细胞系TJ905后3天，上清蛋白SDS-PAGE显示有新条带出现，条带的分子量大小与理论值一致。免疫印渍结果显示有特异性条带出现。【结论】本研究中构建的真核分泌型表达质粒可介导硫酸软骨素酶ABCI在真核细胞中以分泌蛋白形式表达。
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