论文摘要
背景：肺癌已成为临床上最常见的恶性肿瘤,预后差,5年生存率只有10%。肺癌按组织病理学分为SCLC和NSCLC,肺癌患者中约85%为NSCLC,对于NSCLC的治疗,外科手术是最为有效的办法之一,然而70%左右的NSCLC患者初诊时病变已发展至晚期,失去了手术治疗的机会,因此药物治疗成为晚期肺癌的主要治疗手段,术后辅助化疗已被证实可提高患者的生存期,但是在过去二十几年中,NSCLC的3年及5年生存率的提高均不超过4%,而晚期NSCLC患者的5年生存率仍然不超过5%。近来,随着分子生物学研究的不断深入,分子靶向治疗成为了NSCLC治疗研究的新热点。以EGFR-TKIs为代表的分子靶向治疗药物对于晚期NSCLC有着很好的临床疗效。当癌细胞发生EGFR外显子18、19和21突变激活时,可显著提高患者的客观缓解率,延长总生存期。吉非替尼敏感的患者主要是存在EGFR基因的突变,由于吉非替尼对患者的选择性,实际上只有少部分NSCLC患者对吉非替尼有明显的疗效,很大部分患者则无效或疗效差。研究显示,编码EGFR下游GTP酶的KRAS基因突变见于多达30%的肺腺癌,KRAS突变抑制了RAS的GTP酶活性,导致RAS信号处于持续激活状态,进而引起细胞的恶性转化,存在KRAS基因突变的非小细胞肺癌患者难以从辅助化疗中获益,并且对EGFR-TKIs耐药。因此,在非小细胞肺癌患者中,需要有针对KRAS突变的治疗方案。研究发现在突变KRAS基因的相关肿瘤细胞系中,通过抑制STK33能产生肿瘤细胞的致死效应,而对于那些KRAS野生型的细胞系却没有作用。进一步有研究指出肺癌组织中STK33的基因表达量高于正常肺组织及肺良性病变；肺癌、乳腺癌和结肠癌中STK33的蛋白表达水平远高于非癌组织。但是,到目前为止对于STK33的生化特性和生物功能还不是很清楚。目的：探讨肺癌中STK33基因表达情况与EGFR和KRAS基因突变之间的关联性,以探索它们之间的内在联系,希望能够找到更多的与EGFR-TKIs疗效相关的分子生物学指标,为临床检测、治疗提供更多的证据,从而更好的指导肿瘤分子靶向药物EGFR-TKIs的个体化用药。方法：本研究采用Q-RT- PCR法对70例经病理确诊的肺癌病例中的癌组织,远癌组织及21例肺良性病变的STK33基因表达情况进行检测,同时将结果与临床病理资料进行统计分析。进一步对70例肺癌患者中的67例NSCLC组织进行EGFR和KRAS基因突变测序,并将测序结果与STK33表达量进行统计分析。结果：实时荧光定量PCR方法检测STK33基因的表达情况,肺癌组织（ΔCT=8.87±1.89）高于远癌组织（△CT=9.41±1.32）及肺良胜病变组织（△CT=9.77±1.35）,差异具有统计学意义（P<0.05）。肺癌组织中STK33表达量与NSCLC患者的性别、年龄、吸烟史、肿瘤大小、病理类型、分化程度、肿块的位置、分期及患者淋巴结是否转移无关（P>0.05）。EGFR测序结果显示本组NSCLC患者的基因突变率为27%（18/67）,18号外显子2156 G>C,G719A点突变两例,2155 G＞T,G719C点突变两例；19号外显子K745-A750缺失型突变4例,del2236-2250,E746-A750缺失型突变1例,del2236-2253,E746-T751缺失型突变1例；20号外显子2311-2319,N771-773H插入型突变1例,2302-2310,S768-770D插入型突变1例,2303 G>T,S768I点突变4例,2306 G＞T,V769L点突变1例,2327 G＞A,R776H点突变1例；21号外显子2573 T>G L858R点突变3例,2500 G>T,V834L点突变1例。①EGFR突变的肺癌组织中STK33基因表达水平高于远癌组织及肺良性病变组织,这与STK33基因高表达于肺癌组织是一致的。②STK33基因在有EGFR突变的肺癌组织中和无EGFR突变的肺癌组织中的表达量无统计学意义。③与临床资料进行统计学分析显示EGFR突变在女性,不吸烟和腺癌中高发,与年龄、肿块大小、分期、淋巴结转移和是否KRAS突变无统计学意义。KRAS测序结果显示本组NSCLC患者的基因突变率为9%（6/67）,全部发生在第一外显子上,其中G12C点突变4例,G12V突变2例,全为杂合突变。①KRAS突变的肺癌组织中STK33基因表达水平和远癌组织及肺良性病变组织无统计学差异。②STK33基因在有KRAS突变的肺癌组织中和无KRAS突变的肺癌组织中的表达量无统计学意义。③与临床资料进行统计学分析显示KRAS突变与性别、年龄、吸烟史、病理、肿块大小、分期、淋巴结转移和EGFR突变无统计学意义。结论：1肺癌组织中STK33基因的表达量高于远癌组织及肺良性病变组织。2有EGFR突变的肺癌组织中STK33基因的表达量高于远癌组织及肺良性组织。3 STK33基因的表达、KRAS基因的突变与患者的年龄、性别、吸烟史、病理类型、肿块大小、分期和淋巴结转移无统计学意义。4在女性、不吸烟和腺癌患者中易发生EGFR突变,但突变与年龄、肿块大小分期和淋巴结转移无统计学意义。5 STK33基因高表达于有EGFR突变的肺癌组织中,但与无EGFR突变的肺癌组织相比无统计学差异。6在有KRAS基因突变的肺癌组织中STK33基因的表达水平和无KRAS突变的肺癌组织中STK33基因的表达水平无差异。7 STK33的基因表达水平在KRAS突变的肺癌组织中和远癌组织及良性组织中比较无明显差异。8肺癌患者中EGFR突变和KRAS突变分别发生在不同的患者中。9在KRAS突变型和野生型肺癌患者的癌组织中STK33的基因表达水平无差别。10分析肺癌组织中STK33基因的第323位密码子序列,未发现突变现象。11肺癌组织中STK33基因的表达与肺癌的发生、发展可能有一定联系。