论文题目: 亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 动物遗传育种与繁殖学
作者: 程天印
导师: 施启顺,林矫矫
关键词: 亚洲璃眼蜱唾液腺,差异表达基因文库,基因,基因,克隆,表达
文献来源: 湖南农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 从单雌蜱繁殖群中选出未吸血雌成蜱60只,随机分成两组,一组半饱血,另一组不吸血。分离未吸血和半饱血两状态下的蜱唾液腺。经过总RNA提取,第一链合成、长距离扩增、Ras Ⅰ酶切、添加接头,扣除性杂交和选择性扩增等步骤,分离出差异表达基因的cDNA片段。将第二次扩增产物的纯品插入pGEM T-Easy载体,转化DH5a感受态。通过克隆鉴定和序列测定,获得120个有效片段,其中84个认定为序列表达标签（EST）。RT-PCR分析证实,由文库随机选出的10个片段在吸血的雌成蜱唾液腺表达,未吸血的不表达。 与NCBI数据库的片段进行序列比对,结果如下:文库里的120个片段中,90个找到了具有一定相似性的序列,其中与其他蜱的已知基因具有相似性的片段21个,与按蚊、库蚊、钩虫、奥斯特线虫等其他吸血寄生虫基因有一定相似性的片段19个。在与蜱已知基因有相似性的21个片段中,7片段被认定为EST,其中5个具有Poly（A）,2个具有ACGCGGGG;2个既具Poly（A）又具ACGCGGGG（即为全长基因,其中1个已被Genbank接收,登录号为DQ021902）。HaB1和Ha7.7是从上述与蜱已知基因有相似性的EST中筛选而来。 根据HaB1的序列设计出HaB1未知末端扩增引物HaB1-GSP1和HaB1-GSP2。用HaB1-GSP1和UAP扩增由半饱血雌成蜱唾液腺总RNA反转录而成的第一链,HaB1-GSP2和AUAP做巢式扩增,即得HaB1的未知3’-末端。根据HaB1及其3’-末端序列拼接结果,设计GP29的全长扩增引物HaB1-FLP+、HaB1-FLP-,以此扩增cDNA第一链获得新基因GP29（登录号:AY803896）全长。如上设计扩增Ha7.7之5’-端的引物Ha7.7-GSP1、Ha7.7-GSP2、Ha7.7-GSP3和扩增GP15的全长引物Ha7.7-FLP+、Ha7.7-FLP-。克隆Ha7.7得其未知部分和全长GP15（登录号:DQ020265）。RT-PCR分析表明:亚洲璃眼蜱成蜱唾液腺只在吸血时表达两基因。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
第一章 蜱唾液腺活性分子的研究现状
第二章 亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因文库的构建
第三章 目的片段的筛选与新基因GP_(29)和GP_(15)的克隆
第四章 唾液腺新基因GP_(29)的表达与鉴定
第五章 唾液腺新基因GP_(15)的表达及鉴定
总结
参考文献
致谢
作者简介
附录
1，新基因1
2，新基因2
3，新基因3
4，研究中应用的通用引物
5，GP_(29)的全长序列拼接图
6，GP_(15)的全长序列彩图
7，目的蛋白的酶切肽段预测
8，肽谱检索的结果
9，研究中常用试剂的配法
10，论文中的重要缩写符号
11，pGEM-T Easy的克隆区
12，pGEX-4T-1，2，3的克隆区
13，pET32a—c(+)的克隆区
14，抑制性消减杂交原理图
发布时间: 2006-04-03
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标签：亚洲璃眼蜱唾液腺论文; 差异表达基因文库论文; 基因论文; 克隆论文; 表达论文;