香蕉枯萎病菌4号小种鉴别培养基研制与应用

论文摘要

香蕉枯萎病威胁着我国香蕉产业发展。香蕉枯萎病菌的快速检测技术,有助于香蕉枯萎病的早期诊断和对病害实施有效监控。2006～2008年,开展了香蕉枯萎病菌的快速检测技术研究,取得以下结果:1.鉴定培养基的研制通过对KOMADA培养基和K2培养基的改良研究,研制了KM培养基。KM培养基是专用于香蕉枯萎病菌4号小种检测的鉴定培养基。香蕉枯萎病菌4号生理小种在KM培养基上形成的齿轮状菌落是重要的鉴别特征;KM培养基选择性强,能有效抑制杂菌和有利于香蕉枯萎病菌4号小种生长。2.鉴别培养基的应用该鉴别培养基在生产上试用,从香蕉病组织和病田土壤中检测出具有明显鉴别特征的菌落,检出菌通过形态学鉴定、致病性测定、营养亲和性测定、ITS-PCR和RAPD-PCR检测,证实了KM检出的目标菌为香蕉枯萎病菌4号生理小种。应用试验证明了KM鉴别培养基可以用于检测香蕉病组织和田间土壤中的香蕉枯萎病菌4号小种,是一种快速、可靠、简便和实用的检测技术。KM鉴别培养基检测技术与致病性测定、营养亲和性测定、ITS-PCR和RAPD-PCR检测等方法相结合,构建成香蕉枯萎病菌生理小种的检测技术体系。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 一 引言
• 1 香蕉枯萎病的分布与危害
• 1.1 香蕉枯萎病的世界分布与危害
• 1.2 香蕉枯萎病在我国发生状况
• 2 病原菌生物学特性
• 2.1 病原菌生理小种
• 2.2 病害传播途径
• 3 香蕉枯萎病病害诊断和病原菌检测技术
• 3.1 香蕉枯萎病诊断
• 3.2 香蕉枯萎病菌检测
• 3.2.1 生物学检测
• 3.2.2 PCR检测
• 3.2.3 营养体亲和性（VCG）检测
• 3.2.4 选择性培养基检测
• 4 本研究的目的、意义和内容
• 4.1 目的和意义
• 4.2 研究内容
• 4.2.1 香蕉枯萎病菌选择性培养基筛选
• 4.2.2 培养基的分离物检验
• 4.2.3 香蕉枯萎病菌4号小种鉴别培养基改良与应用
• 二 香蕉枯萎病菌选择性培养基的筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 供试土样
• 1.3 基础培养基种类和配方
• 1.4 基础培养基的筛选
• 1.5 选择性培养基制备和筛选
• 1.6 选择性培养基对病田土壤的检测效率比较
• 1.7 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 香蕉枯萎病菌在6种基础培养基上的生长
• 2.2 选择性培养基对镰孢菌不同菌株的生长适性
• 2.3 选择性培养基对香蕉枯萎病菌4号小种的鉴别作用
• 2.4 K2培养基对土壤中香蕉枯萎病菌的检测
• 3 讨论
• 三 K2培养基对香蕉枯萎病菌的选择性验证
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 检出菌株的致病性测定
• 1.2.2 检出菌株的营养亲和性测定
• 1.2.3 香蕉枯萎病菌rDNA-ITS的PCR扩增与序列分析
• 2 结果与分析
• 2.1 致病性测定
• 2.2 供试菌株的营养亲和性测定
• 2.2.1 突变体的诱导和表型鉴定
• 2.2.2 营养亲和性测定
• 2.3 rDNA-ITS序列扩增与分析
• 2.3.1 DNA的提取方法比较与质量分析
• 2.3.2 ITS区扩增及同源性比较
• 3 讨论
• 四 香蕉枯萎病菌4号小种鉴别培养基的制备与应用
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 鉴别培养基改良
• 1.2.1 抑菌剂筛选
• 1.2.2 抑菌剂最佳抑菌浓度试验
• 1.2.3 鉴别培养基配制
• 1.3 鉴别培养基的检测应用
• 1.3.1 不同培养基上培养性状比较
• 1.3.2 不同培养基对土壤中香蕉枯萎病菌的检测比较
• 1.3.3 鉴别培养基对病组织和土壤中病菌的检测
• 1.4 鉴别培养基的检测效果验证
• 1.4.1 致病性测定
• 1.4.2 PCR测定
• 1.5 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 鉴别培养基改良
• 2.1.1 抑菌剂的筛选
• 2.1.2 抑菌剂最佳浓度的确定
• 2.1.3 培养基pH值对培养性状的影响
• 2.1.4 鉴别培养基的配制和命名
• 2.2 KM培养基的检测应用
• 2.2.1 KM培养基的选择性和鉴别特征
• 2.2.2 KM培养基对病组织和土壤的检测
• 2.3 对KM培养基检测效果验证
• 2.3.1 致病性测定
• 2.3.2 PCR测定
• 3 讨论
• 五 小结与展望
• 1 研究成果与创新性
• 1.1 改良制备了KM鉴定培养基
• 1.2 鉴别培养基的研究应用
• 1.2.1 培养基筛选
• 1.2.2 检测效果验证研究
• 2 成果意义与应用前景
• 参考文献
• 附录Ⅰ 试剂与溶液的配制
• 附录Ⅱ
• 附录Ⅲ 硕士期间发表的论文
• 致谢