猪脾转移因子（TF）的制备、生物活性测定及应用研究

论文摘要

本研究以健康猪脾为原料,采用pH值调节-超滤法制备的脾转移因子（TransferFactor,简称TF）,生产工艺简单,不需特殊设备及试剂,生产成本低廉,符合中华人民共和国药典生物制剂标准。试验结果表明:pH值调节-超滤法制备的猪脾转移因子pH值为7.00,经紫外光谱分析,猪脾转移因子在250-260处有峰值,A260/A280=2.25;用二羟基甲苯法测得核糖含量为33.51ml;用双缩脲法测得多肽含量为313.82ml;高效液相色谱仪测定氨基酸含量,游离氨基酸相对百分含量依次以谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、苏氨酸和丙氨酸含量最高,而半胱氨酸、精氨酸、组氨酸、蛋氨酸、酪氨酸和赖氨酸的含量相对较少。向小白鼠体内注射相当于60倍于人的应用剂量（浓缩6倍）时,小白鼠也没有任何毒性反应,证明转移因子安全和无毒性。注射猪脾转移因子注射液后,试验兔体温变化均小于0.6℃,热源试验结果为阴性。外周血涂片用改良酯酶法染色后,在油镜下镜检,并进行分类计算,计算T细胞比值,试验组注射猪脾转移因子前T细胞为48.9±4.2%,注射猪脾转移因子后T细胞值为61.5±2.8%;注射前后T细胞增殖差异极显著（p＜0.01）。无菌试验、过敏试验、抗原检验结果均为阴性。pH值调节-超滤法制备的猪脾转移因子对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑制作用很强,呈高度敏感,抑菌圈直径分别为25±1.0mm和40±1.0mm;对巴氏杆菌抑制作用较强,呈中度敏感,抑菌圈直径为15±1.0mm;对链球菌抑制作用较弱,呈低度敏感,抑菌圈直径为12±1.0mm。猪脾转移因子对小白鼠腹腔Mφ的吞噬百分率和吞噬指数试验组与对照组相比有显著的升高,经统计学t检验,差异极显著（P＜0.01）;但猪脾TF对小白鼠的脾重无显著影响。采用转移因子致敏制备鸡抗猪瘟高免卵黄抗体,同时用猪瘟活疫苗多次免疫长沙黄母鸡,收集第5次免疫后的鸡蛋,用聚乙二醇6000（PEG 6000）置换法获得了纯度较高的抗猪瘟高免卵黄抗体。试验结果表明:用此法获得的抗猪瘟高免卵黄抗体性质稳定、无杂菌生长、抗体效价高（第5次免疫后卵黄抗体效价滴度为1:128）、无任何毒副作用;临床治疗试验结果表明:使用转移因子致敏制备的鸡抗猪瘟高免卵黄抗体对早、中期猪瘟治疗效果比使用中等剂量的猪瘟弱毒苗效果好,且差异极显著（P＜0.01）。以猪脾转移因子作猪蓝耳病疫苗的免疫增强剂,观察其对猪蓝耳病疫苗的免疫影响,试验结果表明:单独使用蓝耳病疫苗免疫猪群,抗体出现时间较晚,免疫后28天,抗体OD650值为0.51,S/P值为0.77,才呈阳性,产生保护作用;而辅佐TF2mg/头以上,抗体产生时间明显提前,免疫后14天既能产生有效保护,且抗体效价和S/P值均极显著的高于单独使用蓝耳病疫苗免疫的对照组（P＜0.01）,这说明TF是一种对猪蓝耳病疫苗十分有效的佐剂。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 转移因子的发现与研究发展过程
• 2 动物转移因子的研究现状
• 2.1 动物特异性TF的试验研究
• 2.2 动物 TF的非特异性免疫功能研究
• 3 动物转移因子的理化性质
• 4 转移因子的生物学活性
• 4.1 免疫学特性
• 4.2 转移因子的特异性与非特异性
• 4.3 转移因子的种属差异
• 5 转移因子的作用机理
• 5.1 传递特异非特异细胞免疫信息，激活正常淋巴细胞、修复淋巴细胞膜受体的免疫活性
• 5.2 调节细胞免疫
• 5.3 抗放射、抗免疫抑制剂、提升白细胞作用
• 5.4 TF诱导启动干扰素的作用
• 5.5 人工被动免疫作用
• 6 转移因子的临床应用
• 6.1 转移因子在人医临床上的应用
• 6.2 转移因子在兽医临床上的应用
• 7 转移因子制备方法的研究
• 8 小结与展望
• 第二章 猪脾转移因子的制备、成分分析与活性测定及临床疗效试验
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验原材料—猪脾脏
• 1.1.2 试验动物
• 1.1.3 主要试剂与药物
• 1.1.4 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 制备工艺
• 1.2.2 猪脾转移因子理化性质分析
• 1.2.3 猪脾转移因子生物特性检测
• 1.2.4 TF的辅助临床治疗方法
• 2 结果与分析
• 2.1 物理性状
• 2.2 理化性质
• 2.3 猪脾TF原液中游离氨基酸相对百分含量测定
• 2.4 生物学特性
• 2.4.1 毒性试验
• 2.4.2 热源试验
• 2.4.3 免疫生物学活性
• 2.4.4 Mφ的吞噬试验
• 2.4.5 体外抑菌试验
• 2.5 TF的辅助临床疗效
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 TF致敏抗猪瘟高免卵黄抗体的制备及对猪瘟的疗效试验
• 1. 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验动物
• 1.1.2 免疫原
• 1.1.3 主要试剂与药品
• 1.2 方法
• 1.2.1 免疫方法
• 1.2.2 高免卵黄抗体的制备
• 1.2.3 高免卵黄液的生物学检验
• 1.2.4 高免卵黄抗体的分离纯化
• 1.2.5 猪瘟正向间接红细胞凝集反应
• 1.2.6 血凝抑制试验
• 1.2.7 治疗对比试验
• 2 结果与分析
• 2.1 高免卵黄液的生物学检验
• 2.1.1 性状检验
• 2.1.2 无菌检验
• 2.2 猪瘟正向间接血凝试验结果
• 2.3 血凝抑制试验结果
• 2.4 高免卵黄抗体效价测定结果
• 2.5 临床治疗对比试验结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 猪脾转移因子对猪蓝耳病疫苗免疫影响的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.1.1 试验动物
• 1.1.2 蓝耳病疫苗
• 1.1.3 猪脾转移因子
• 1.1.4 猪繁殖系统与呼吸综合症病毒抗体ELISA检测试剂盒
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 试验动物分组
• 1.2.2 免疫方法
• 1.2.3 ELISA诊断试剂盒检测血清中特异性抗体
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 附录 论文中的重要英文缩写
• 致谢
• 作者简介