iNOS及cNOS在SD大鼠髁突软骨细胞分化过程中作用的研究

论文摘要

目的：观察体外单层培养的髁突软骨细胞中加入全反式维甲酸后，不同时间碱性磷酸酶、一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶和结构型一氧化氮合酶表达水平的变化，探讨全反式维甲酸对髁突软骨细胞分化的影响，及其各型一氧化氮合酶在其中的作用。观察在全反式维甲酸诱导下的髁突软骨细胞中加入细胞外钙离子通道阻断剂乙二醇双乙胺醚-N．N’四乙酸后，碱性磷酸酶表达水平的变化，探讨不同类型一氧化氮合酶在其中的作用。材料和方法：1．选用新生SD大鼠的髁突软骨作为细胞培养的组织来源，建立髁突软骨细胞有限细胞系。在培养的第二代髁突软骨细胞中加入浓度为10-7mol／L全反式维甲酸，分别在48、72、96、120小时用分光光度计测量碱性磷酸酶、一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶、结构型一氧化氮合酶各自的表达水平。对照组除不加维甲酸外其它培养条件和检测方法和实验组相同。2．在10-7mol／L全反式维甲酸处理72小时后的细胞中加入0.25-1mmol／L非选择性一氧化氮合酶抑制剂—L-单甲基精氨酸，并于24小时后测定碱性磷酸酶表达水平的变化。对照组除不加L-单甲基精氨酸外，其它条件和实验组相同。3．在全反式维甲酸处理72小时的细胞中加入2mmol／L细胞外钙离子通道阻断剂乙二醇双乙胺醚-N．N’四乙酸，分别于8、12、24小时后观碱性磷酸酶的表达水平。对照组除不加乙二醇双乙胺醚-N．N’四乙酸外，其它培养条件和检测方法和实验组相同。结果：1．浓度为10-7mol／L的全反式维甲酸作用48小时—96小时，细胞碱性磷酸酶、一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶和结构型一氧化氮合酶的表达水平均随时间增加而增加，同组不同时间和实验组与对照组之间有显著性差异，其中诱导型一氧化氮合酶表达水平远远高于结构型一氧化氮合酶。作用120小时后，各值表达与96小时同组相比有所降低，但对照组和实验组之间仍有显著性差异。提示在维甲酸诱导下的髁突软骨细胞分化过程中一氧化氮及其合酶可能发挥着积极作用。2．在加入非选择性一氧化氮合酶抑制剂L-单甲基精氨酸后，随着L-单甲基精氨酸的浓度增加，碱性磷酸酶表达水平逐渐降低接近基础水平。这就提示一氧化氮合酶对细胞的分化可能起着重要促进作用。3．在加入细胞外钙离子通道阻断剂乙二醇双乙胺醚-N．N’四乙酸8、12、24小时后，碱性磷酸酶的表达水平与对照组相比有所降低，但仍显著高于对照组，这也提示iNOS及cNOS一氧化氮合酶在细胞分化阶段都可能起到调控作用，其中诱导型一氧化氮合酶的作用可能要更为突出。

论文目录

• 英文缩写词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 实验一 髁突软骨细胞的体外培养
• 一、材料
• 二、结果
• 三、讨论
• 四、结论
• 实验二 iNOS及cNOS在大鼠髁突软骨细胞分化过程中作用的研究
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 五、结论
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 综述