金雀异黄酮对缺氧诱导的内皮细胞中HIF-1α和VEGF表达的影响

论文摘要

目的:探讨金雀异黄酮（Genistein,Gen）对低氧模拟剂氯化钴（cobalt chloride,CoCl2）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC-12）中缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法:以不同浓度（0μM,25μM,50μM,100μM,150μM,200μM）的化学缺氧剂CoCl2处理体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC-12）8h,观察CoCl2对内皮细胞作用的量效关系;再用最大效应浓度的CoCl2（100μM）处理细胞不同时间（0h,1h,2h,4h,8h,12h,24h）,观察CoCl2对内皮细胞作用的时效关系;放线菌酮（Cicloheximide,CHX）作用CoCl2诱导的内皮细胞验证缺氧内皮细胞中HIF-1α与VEGF蛋白表达的相关性。为观察Genistein的干预作用,以不同浓度的Genistein（0μM,50μM,100μM,150μM,200μM）预处理细胞0.5h,再用100μM的CoCl2作用8h。噻唑蓝（MTT）比色法观察HUVEC-12细胞增殖情况;RT-PCR检测HIF-1α与VEGF的mRNA水平;Western Blot法检测HIF-1α蛋白与VEGF蛋白的表达水平。结果: RT-PCR结果显示,CoCl2对HUVEC-12细胞中HIF-1αmRNA的表达几乎没有影响,而VEGF mRNA的表达则呈剂量依赖性和时间依赖性增加,在CoCl2浓度为100μM或刺激8h时作用最为明显。Western Blot结果显示HIF-1α蛋白和VEGF蛋白均随CoCl2浓度增加而表达上调。CoCl2作用HUVEC-12细胞不同时间后,HIF-1α蛋白和VEGF蛋白表达的增加呈时间依赖性,HIF-1α在4h、8h明显增加,12h后有所下降;而VEGF在8h作用最明显。CHX作为HIF-1α的蛋白抑制剂在使HIF-1α蛋白表达下调的同时,也使VEGF蛋白表达下降。MTT结果表明CoCl2能刺激HUVEC-12细胞增殖,当CoCl2浓度为100μM时作用最明显。RT-PCR结果显示Genistein能剂量依赖性地抑制HUVEC-12细胞中VEGF mRNA的表达,但不影响HIF-1αmRNA的表达。Western Blot结果示Genistein能抑制HUVEC-12细胞中HIF-1α蛋白和VEGF蛋白表达,且这种抑制作用呈剂量依赖性。MTT结果示Genistein呈剂量依赖性地抑制CoCl2诱导的HUVEC-12细胞增殖。结论:（1） CoCl2能增加HUVEC-12细胞HIF-1α蛋白表达,并使VEGF mRNA及VEGF蛋白的表达上调;CoCl2能诱导HUVEC-12细胞增殖。（2） Genistein能抑制CoCl2诱导的HUVEC-12细胞中HIF-1α及VEGF的表达上调;Genistein能抑制CoCl2诱导的HUVEC-12细胞增殖。

论文目录

• 一、主要英文缩略语
• 二、中文摘要
• 三、英文摘要
• 四、正文
• ⒈引言
• ⒉实验材料
• ⒊实验方法
• ⒋实验结果
• ⒌讨论
• ⒍结论
• 五、参考文献
• 六、文献综述
• 七、成果目录
• 八、致谢